MSCs源性神經(jīng)細(xì)胞的凋亡和p75NTR的作用研究.pdf

1、目的：
　　 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植，是臨床治療中樞神經(jīng)損傷性疾病的極具前景的方法之一。由于MSCs源性神經(jīng)細(xì)胞易于凋亡，因而如何抑制其凋亡的發(fā)生，延長被移植細(xì)胞的存活時(shí)間是目前急待解決的關(guān)鍵問題。因此，闡明MSCs源性神經(jīng)細(xì)胞的凋亡規(guī)律，探討應(yīng)用相關(guān)細(xì)胞凋亡抑制劑延長其存活時(shí)間等也是骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植研究領(lǐng)域中，急需解決的問題。在腦缺血疾病和神經(jīng)退行性疾病中，神經(jīng)細(xì)胞凋亡是十分重要的發(fā)病機(jī)制。在這些情況下，神經(jīng)細(xì)胞凋亡增強(qiáng)的機(jī)

2、制與p75NTR的高表達(dá)密切相關(guān)[1-5]。
　　 針對這些關(guān)鍵性問題，本研究擬從大鼠骨髓中提取間充質(zhì)干細(xì)胞，并誘導(dǎo)、分化為神經(jīng)細(xì)胞。在此基礎(chǔ)上，觀察MSCs源性神經(jīng)細(xì)胞的凋亡情況。并同時(shí)觀察p75NTR在凋亡中的作用，為今后抑制MSCs源性神經(jīng)細(xì)胞的凋亡，延長其存活時(shí)間尋找新的靶點(diǎn)。
　　 方法：
　　 從大鼠骨髓中分離骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，體外傳代培養(yǎng)后，誘導(dǎo)其向神經(jīng)細(xì)胞分化。應(yīng)用免疫熒光印跡的方法檢測誘導(dǎo)后神經(jīng)

3、細(xì)胞表面的標(biāo)記物nestin、NF-200及GFAP。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測誘導(dǎo)后神經(jīng)細(xì)胞的凋亡。應(yīng)用RT-PCR及westernblot觀察骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞來源神經(jīng)細(xì)胞凋亡與p75NTR的關(guān)系，進(jìn)一步應(yīng)用p75NTR抑制劑，研究其對誘導(dǎo)的神經(jīng)樣細(xì)胞凋亡的影響。
　　 結(jié)果：
　　 體外誘導(dǎo)后，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞90％以上向神經(jīng)細(xì)胞轉(zhuǎn)化，同時(shí)表面標(biāo)記物nestin在0h、6h、12h、和24 h表達(dá)分別為53.1±5.3、92

4、.6±1.4、78.6±4.2和30.5±3.4;NF-200在6h、12h、和24 h表達(dá)分別為89.3±3.9、92.6±2.2and96.8±1.9; GFAP表達(dá)為陰性。誘導(dǎo)后0h、6h、12 h和24 h神經(jīng)細(xì)胞凋亡檢測結(jié)果分別為2.84±0.32、2.22±0.43、8.77±0.86和13.85±1.68。RT-PCR結(jié)果為6h、12h、24h可檢測到p75NTR表達(dá)。Western blot結(jié)果為6h、12h、24h可檢