醋酸鉛致神經(jīng)細(xì)胞凋亡的研究.pdf

1、前言鉛是最古老的毒物之一。在現(xiàn)今生活中，由于鉛的廣泛應(yīng)用使得鉛的污染也廣泛存在，雖然我們采取了一些措施來(lái)減少鉛的影響，但是鉛仍然對(duì)人體健康造成了很大傷害。鉛具有很強(qiáng)的神經(jīng)毒性，主要表現(xiàn)為鉛對(duì)未成熟個(gè)體學(xué)習(xí)記憶的損害，使未成年人發(fā)生學(xué)習(xí)記憶功能障礙。鉛對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的毒性作用和低濃度鉛引發(fā)的神經(jīng)元凋亡有關(guān)。神經(jīng)細(xì)胞過(guò)度凋亡，則必然會(huì)對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的正常發(fā)育和分化造成嚴(yán)重的影響。在體的動(dòng)物研究已經(jīng)有結(jié)果證明這一現(xiàn)象的存在。我們建立了細(xì)胞模型來(lái)進(jìn)

2、一步研究這一作用的分子以及基因機(jī)制。我們選用了以前研究中不常見(jiàn)的人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞U-251細(xì)胞作為研究對(duì)象。 目的:建立鉛染毒導(dǎo)致U-251細(xì)胞凋亡的模型。觀察U-251細(xì)胞在鉛染毒情況下的變化，并確認(rèn)其發(fā)生了細(xì)胞凋亡。研究其在凋亡的過(guò)程凋亡相關(guān)基因的改變。 方法: MTT；DNA LADDER；細(xì)胞熒光染色；基因芯片。 結(jié)果: 1．U-251細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線。細(xì)胞在37℃，5％CO2和飽和濕度的培養(yǎng)箱中培

3、養(yǎng)，接種后每二十四小時(shí)進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，獲得細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線。從曲線可知，U-251細(xì)胞的倍增時(shí)間約為24小時(shí)，第1d細(xì)胞處于停滯期；第2-6d細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期；第7-8d細(xì)胞處于平臺(tái)期，此時(shí)的細(xì)胞由于數(shù)量太多，互相接觸，導(dǎo)致接觸抑制，生長(zhǎng)速度變慢，開(kāi)始死亡，數(shù)量有所減少。 2．使用MTL法測(cè)定醋酸鉛作用于U-251細(xì)胞的時(shí)間濃度曲線，并使用SPSS軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行方差檢驗(yàn)。試驗(yàn)的結(jié)果說(shuō)明，醋酸鉛能夠明顯抑制細(xì)胞的生長(zhǎng)，這種抑制

4、作用與醋酸鉛的作用時(shí)間和作用劑量都呈正相關(guān)的關(guān)系。其IC50在0.2mmol/L附近。隨著作用時(shí)間的增加，各作用劑量組之間的差異也更加明顯。 3．U-251細(xì)胞凋亡的確定以及醋酸鉛作用時(shí)間和濃度的確定。在醋酸鉛的作用下，U251細(xì)胞確實(shí)發(fā)生了細(xì)胞凋亡，這種導(dǎo)致凋亡的作用隨著作用劑量和作用時(shí)間的增加而增強(qiáng)。綜合MTT的結(jié)果和本部分對(duì)細(xì)胞凋亡的檢測(cè)試驗(yàn)結(jié)果，確定下一步試驗(yàn)的作用條件為醋酸鉛濃度為0.5mmol/L，作用時(shí)間為72小時(shí)