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文檔簡(jiǎn)介
1、研究目的:本試驗(yàn)通過(guò)研究醋酸鉛導(dǎo)致大鼠腎小管上皮細(xì)胞(NRK細(xì)胞)的氧化損傷程度、細(xì)胞凋亡以及線粒體通路在醋酸鉛致NRK細(xì)胞凋亡過(guò)程中的作用,旨在探討鉛對(duì)動(dòng)物腎臟毒性的作用機(jī)制,為防治鉛中毒提供理論依據(jù)。
研究方法:體外培養(yǎng)NRK細(xì)胞,結(jié)晶紫染色觀察細(xì)胞形態(tài);MTT方法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)曲線,于細(xì)胞對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期加入0,0.5,1.0和2.0μM的醋酸鉛作用12h后,MTT法測(cè)定細(xì)胞增殖率;采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定超氧化物歧化酶(SO
2、D)活力;硫代巴比妥酸(TBA)法測(cè)定細(xì)胞中丙二醛(MDA)含量;比色法檢測(cè)細(xì)胞中谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)活性;Hoechst33342和AnnexinV-FITC/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡。羅丹明123進(jìn)行線粒體膜電位檢測(cè);分光光度法檢測(cè)caspase-3,caspase-9的活性,westernblot檢測(cè)其蛋白表達(dá)量;流式細(xì)胞儀檢測(cè)Z-VAD-FMK及Ac-LEHD-FMK對(duì)細(xì)胞凋亡的抑制作用。
結(jié)果:NRK
3、細(xì)胞在36℃、5%CO2環(huán)境下生長(zhǎng)良好,24-72h為細(xì)胞對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。醋酸鉛對(duì)NRK細(xì)胞的IC50為(2.44±0.32)μM。試驗(yàn)所選醋酸鉛濃度0.5、1.0、2.0μM均可通過(guò)降低SOD、GSH-Px活性,升高M(jìn)DA的含量而引起細(xì)胞氧化損傷,并呈劑量-效應(yīng)相關(guān)性;可呈劑量依賴性誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。研究表明,醋酸鉛可通過(guò)caspase依賴性的線粒體凋亡途徑誘導(dǎo)NRK細(xì)胞的凋亡,主要表現(xiàn)在:顯著性地降低細(xì)胞線粒體膜電位,激活caspase-3
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