醋酸鉛對體外培養(yǎng)NRK細(xì)胞的毒性作用及凋亡機(jī)理的研究.pdf

1、研究目的：本試驗(yàn)通過研究醋酸鉛導(dǎo)致大鼠腎小管上皮細(xì)胞(NRK細(xì)胞)的氧化損傷程度、細(xì)胞凋亡以及線粒體通路在醋酸鉛致NRK細(xì)胞凋亡過程中的作用，旨在探討鉛對動(dòng)物腎臟毒性的作用機(jī)制，為防治鉛中毒提供理論依據(jù)。
　　 研究方法：體外培養(yǎng)NRK細(xì)胞，結(jié)晶紫染色觀察細(xì)胞形態(tài)；MTT方法檢測細(xì)胞生長曲線，于細(xì)胞對數(shù)生長期加入0，0.5，1.0和2.0μM的醋酸鉛作用12h后，MTT法測定細(xì)胞增殖率；采用黃嘌呤氧化酶法測定超氧化物歧化酶(SO

2、D)活力；硫代巴比妥酸(TBA)法測定細(xì)胞中丙二醛(MDA)含量；比色法檢測細(xì)胞中谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性；Hoechst33342和AnnexinV-FITC/PI雙染法檢測細(xì)胞凋亡。羅丹明123進(jìn)行線粒體膜電位檢測；分光光度法檢測caspase-3，caspase-9的活性，westernblot檢測其蛋白表達(dá)量；流式細(xì)胞儀檢測Z-VAD-FMK及Ac-LEHD-FMK對細(xì)胞凋亡的抑制作用。
　　 結(jié)果：NRK

3、細(xì)胞在36℃、5％CO2環(huán)境下生長良好，24-72h為細(xì)胞對數(shù)生長期。醋酸鉛對NRK細(xì)胞的IC50為(2.44±0.32)μM。試驗(yàn)所選醋酸鉛濃度0.5、1.0、2.0μM均可通過降低SOD、GSH-Px活性，升高M(jìn)DA的含量而引起細(xì)胞氧化損傷，并呈劑量-效應(yīng)相關(guān)性；可呈劑量依賴性誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。研究表明，醋酸鉛可通過caspase依賴性的線粒體凋亡途徑誘導(dǎo)NRK細(xì)胞的凋亡，主要表現(xiàn)在：顯著性地降低細(xì)胞線粒體膜電位，激活caspase-3