鉛對SD乳鼠成骨細(xì)胞毒性機(jī)理的研究.pdf

1、許多研究表明，鉛對全身各系統(tǒng)和器官均有毒性作用，主要是神經(jīng)、心血管系統(tǒng)、骨代謝。鉛可以通過對鈣磷代謝、骨鈣素、內(nèi)分泌系統(tǒng)等的影響，干擾了骨形成，造成功能性的衰退，引起獨(dú)特的疾病類型或病理性的改變。成骨細(xì)胞是骨形成細(xì)胞，負(fù)責(zé)骨基質(zhì)的合成、分泌和礦化，對骨組織的生長發(fā)育、骨代謝平衡、骨量維持和損傷修復(fù)起關(guān)鍵作用。體外分離培養(yǎng)高純度、活力強(qiáng)的成骨細(xì)胞是毒理學(xué)研究的基礎(chǔ)。本試驗(yàn)在建立體外分離培養(yǎng)新生SD大鼠顱蓋骨成骨細(xì)胞基礎(chǔ)上，研究鉛對成骨細(xì)胞

2、毒性的機(jī)理，為探討鉛對正常骨生理功能的影響，提供了一定的理論依據(jù)。 1.成骨細(xì)胞的分離培養(yǎng)與鑒定 采用改良的二次酶消化法獲得大鼠顱蓋骨成骨細(xì)胞，待細(xì)胞融合成單層后傳代。倒置顯微鏡下觀察成骨細(xì)胞的形態(tài)及生長情況，NBT/BCIP試劑盒和茜素紅礦化結(jié)節(jié)染色鑒定成骨細(xì)胞。結(jié)果，此法分離的成骨細(xì)胞生長狀態(tài)良好，純度較高。 2.鉛對成骨細(xì)胞形態(tài)與活力的影響 為觀察鉛對成骨細(xì)胞增殖及分化的影響，添加了不同濃度的鉛溶液

3、(0、20、40、80μmol/L)作用成骨細(xì)胞24h。倒置顯微鏡觀察成骨細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化，MTT測定成骨細(xì)胞增殖，PNPP法檢測細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶(ALP)活性。結(jié)果顯示，對照組成骨細(xì)胞生長旺盛，結(jié)構(gòu)特征典型；與對照組比較，鉛溶液濃度80μmol/L時(shí)，細(xì)胞毒性加重，細(xì)胞多崩解。成骨細(xì)胞增殖和ALP活性隨著鉛濃度的增加逐漸降低。各染毒組成骨細(xì)胞的增殖和ALP活性，均差異顯著或極顯著(P<0.05或P<0.01)；說明，一定量的鉛可以導(dǎo)

4、致成骨細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)受損，降低成骨能力。 3.鉛對成骨細(xì)胞鈣調(diào)蛋白含量的影響 為了解鉛對成骨細(xì)胞鈣調(diào)蛋白含量的影響，通過添加不同濃度的鉛溶液(0、20、40、80μmol/L)作用成骨細(xì)胞24h。結(jié)果顯示，與對照組比較，鉛的染毒濃度20μmol/L時(shí)，成骨細(xì)胞鈣調(diào)蛋白的mRNA和蛋白表達(dá)減少；但差異不明顯(p>0.05)。鉛的染毒濃度>40μmol/L時(shí)，成骨細(xì)胞鈣調(diào)蛋白的mRNA表達(dá)均明顯增加；差異顯著或極顯著(P<0

5、.05或P<0.01)；同時(shí)成骨細(xì)胞鈣調(diào)蛋白蛋白表達(dá)量也明顯增加。表明鉛在一定濃度范圍內(nèi)能引起成骨細(xì)胞的鈣調(diào)蛋白的mRNA和蛋白表達(dá)增加。 4.鉛對成骨細(xì)胞磷脂酰膽堿特異性磷脂酶C(PC-PLC)的影響 通過加入不同濃度的鉛溶液(0、20、40、80μmol/L)培養(yǎng)成骨細(xì)胞24h，研究鉛對成骨細(xì)胞PC-PLC的影響。結(jié)果表明，各不同濃度的鉛溶液導(dǎo)致成骨細(xì)胞PC-PLC活性下降和磷脂酰膽堿特異性磷脂酶C蛋白量表達(dá)降低，與