復(fù)方板藍(lán)根多糖對(duì)鉛致NRK細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及其機(jī)理研究.pdf

1、人們已經(jīng)開始廣泛關(guān)注鉛對(duì)腎臟的毒性作用。目前，鉛的毒性作用機(jī)理還不很清楚，驅(qū)鉛藥物的效果也不很理想。探索一種天然、低風(fēng)險(xiǎn)、殘留少，有效預(yù)防治療動(dòng)物鉛中毒的藥物，可為防治鉛中毒提供了新的思路和途徑。
　　研究目的:本試驗(yàn)通過研究復(fù)方板藍(lán)根多糖對(duì)鉛致大鼠腎小管上皮細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用及對(duì)細(xì)胞凋亡線粒體通路的影響作用，探索復(fù)方板藍(lán)根多糖對(duì)鉛腎毒性的保護(hù)作用及其對(duì)細(xì)胞凋亡的調(diào)控作用機(jī)理。
　　研究方法:(1)在體外培養(yǎng)的NRK細(xì)胞

2、中，通過分別加入不同濃度的復(fù)方板藍(lán)根多糖（終濃度分別為0、0.5、1、2、5、10、20、50、100μg/mL）以及不同濃度的醋酸鉛(終濃度分別為0、0.5、1、2、5、10、20、50μmol/L)于37℃孵育24h后，采用MTT法檢測(cè)復(fù)方板藍(lán)根多糖和醋酸鉛對(duì)細(xì)胞相對(duì)活力的影響。(2)在此基礎(chǔ)上，選用50μmol/L醋酸鉛和2、10、50μg/mL復(fù)方板藍(lán)根多糖，進(jìn)行分組試驗(yàn)，通過采用WST-1法檢測(cè)超氧化物歧化酶(SOD)活性，紫

3、外比色法檢測(cè)細(xì)胞中總谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)的活性，顯色底物法檢測(cè)細(xì)胞中過氧化氫酶(CAT)的活性，以及硫代巴比妥酸(TBA)法檢測(cè)細(xì)胞中丙二醛(MDA)的含量變化;熒光探針DCFH-DA法檢測(cè)細(xì)胞中活性氧(ROS)的含量;用熒光Hoechst33258染色法、AnnexinⅤ-FITC/PI雙染法和流式細(xì)胞儀檢測(cè)復(fù)方板藍(lán)根多糖對(duì)細(xì)胞凋亡的抑制作用。并用Western-Blot檢測(cè)Caspase-3、Caspase-9、Bax

4、、Bcl-2和P53蛋白的表達(dá)量變化。
　　結(jié)果:在本試驗(yàn)設(shè)計(jì)的0.1、0.2、0.5、1、5、10、20、50、100μg/mL的復(fù)方板藍(lán)根多糖中，當(dāng)多糖濃度達(dá)到50～100μg/mL時(shí)，對(duì)NRK細(xì)胞的生長(zhǎng)具有一定的促進(jìn)作用;醋酸鉛可抑制NRK細(xì)胞增殖。當(dāng)其濃度大于1μmol/L時(shí)，即對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生顯著的抑制作用，且具有明顯的劑量效應(yīng)關(guān)系，當(dāng)濃度達(dá)到10μmol/L時(shí)，可使細(xì)胞的存活率低于50％;50μg/mL多糖劑量組可明顯降低醋

5、酸鉛對(duì)細(xì)胞的抑制作用;2、10、50μg/mL的復(fù)方板藍(lán)根多糖，均可使染鉛組細(xì)胞內(nèi)SOD、GSH-Px、CAT的活性升高，同時(shí)降低細(xì)胞內(nèi)的MDA含量。尤其是對(duì)GSH-Px和MDA的作用更加明顯;復(fù)方板藍(lán)根多糖濃度達(dá)2μg/mL以上時(shí)，可顯著地減少染鉛NRK細(xì)胞內(nèi)ROS含量及凋亡率，且具有一定的劑量依賴性;復(fù)方板藍(lán)根粗多糖可通過上調(diào)抑凋亡蛋白Bcl-2，下調(diào)促凋亡蛋白P53、Bax蛋白的表達(dá)量，阻止Procaspase-9和Procasp