復方板藍根多糖對鉛致NRK細胞損傷的保護作用及其機理研究.pdf

1、人們已經開始廣泛關注鉛對腎臟的毒性作用。目前，鉛的毒性作用機理還不很清楚，驅鉛藥物的效果也不很理想。探索一種天然、低風險、殘留少，有效預防治療動物鉛中毒的藥物，可為防治鉛中毒提供了新的思路和途徑。
　　研究目的:本試驗通過研究復方板藍根多糖對鉛致大鼠腎小管上皮細胞氧化損傷的保護作用及對細胞凋亡線粒體通路的影響作用，探索復方板藍根多糖對鉛腎毒性的保護作用及其對細胞凋亡的調控作用機理。
　　研究方法:(1)在體外培養(yǎng)的NRK細胞

2、中，通過分別加入不同濃度的復方板藍根多糖（終濃度分別為0、0.5、1、2、5、10、20、50、100μg/mL）以及不同濃度的醋酸鉛(終濃度分別為0、0.5、1、2、5、10、20、50μmol/L)于37℃孵育24h后，采用MTT法檢測復方板藍根多糖和醋酸鉛對細胞相對活力的影響。(2)在此基礎上，選用50μmol/L醋酸鉛和2、10、50μg/mL復方板藍根多糖，進行分組試驗，通過采用WST-1法檢測超氧化物歧化酶(SOD)活性，紫

3、外比色法檢測細胞中總谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)的活性，顯色底物法檢測細胞中過氧化氫酶(CAT)的活性，以及硫代巴比妥酸(TBA)法檢測細胞中丙二醛(MDA)的含量變化;熒光探針DCFH-DA法檢測細胞中活性氧(ROS)的含量;用熒光Hoechst33258染色法、AnnexinⅤ-FITC/PI雙染法和流式細胞儀檢測復方板藍根多糖對細胞凋亡的抑制作用。并用Western-Blot檢測Caspase-3、Caspase-9、Bax

4、、Bcl-2和P53蛋白的表達量變化。
　　結果:在本試驗設計的0.1、0.2、0.5、1、5、10、20、50、100μg/mL的復方板藍根多糖中，當多糖濃度達到50～100μg/mL時，對NRK細胞的生長具有一定的促進作用;醋酸鉛可抑制NRK細胞增殖。當其濃度大于1μmol/L時，即對細胞產生顯著的抑制作用，且具有明顯的劑量效應關系，當濃度達到10μmol/L時，可使細胞的存活率低于50％;50μg/mL多糖劑量組可明顯降低醋

5、酸鉛對細胞的抑制作用;2、10、50μg/mL的復方板藍根多糖，均可使染鉛組細胞內SOD、GSH-Px、CAT的活性升高，同時降低細胞內的MDA含量。尤其是對GSH-Px和MDA的作用更加明顯;復方板藍根多糖濃度達2μg/mL以上時，可顯著地減少染鉛NRK細胞內ROS含量及凋亡率，且具有一定的劑量依賴性;復方板藍根粗多糖可通過上調抑凋亡蛋白Bcl-2，下調促凋亡蛋白P53、Bax蛋白的表達量，阻止Procaspase-9和Procasp