胃腸腫瘤三維培養(yǎng)體外藥敏試驗與多藥耐藥基因蛋白相關(guān)性研究.pdf

1、惡性腫瘤是一大類嚴(yán)重威脅人類生命和健康的疾病，胃腸腫瘤在惡性腫瘤譜中占據(jù)重要的地位，發(fā)病率尚在逐年增加，死亡率雖有所改善，但仍居高不下。手術(shù)是胃腸腫瘤的主要治療方法，但單純手術(shù)的療效相當(dāng)有限?；熣加性絹碓街匾牡匚?，但目前療效仍不理想。腫瘤是一個異質(zhì)性、多態(tài)性、分化不均的細(xì)胞群體，腫瘤多藥耐藥普遍存在，這些都會影響化療效果。不當(dāng)?shù)幕煵坏荒芫徑獠∏?，尚有可能誘發(fā)多重耐藥，導(dǎo)致治療失敗。因此，為實現(xiàn)化療個體化，防止多藥耐藥的發(fā)生，通過

2、預(yù)測個體腫瘤對藥物的敏感性來指導(dǎo)臨床治療，以提高療效，早已成為化療界矚目的問題。 國內(nèi)外臨床研究表明，腫瘤體外藥敏檢測與臨床療效存在一定的相關(guān)性，可較好地指導(dǎo)臨床用藥，提高療效，延長患者生存。但傳統(tǒng)的單層細(xì)胞培養(yǎng)藥敏試驗與臨床實際存在一定差別，限制了它們在臨床上的應(yīng)用。更多學(xué)者開始尋求敏感、標(biāo)準(zhǔn)化、快速、簡易且與臨床相關(guān)性好的方法，希望能建立反映體內(nèi)腫瘤真實生長情況的藥敏試驗?zāi)Ｐ汀?腫瘤化療失敗的一個主要原因是多藥耐藥性

3、，膜糖蛋白介導(dǎo)的藥物外排機(jī)制是研究最多的機(jī)制，此類膜糖蛋白主要有P-糖蛋白，多藥耐藥相關(guān)蛋白，乳腺癌耐藥相關(guān)蛋白和肺耐藥相關(guān)蛋白。這些蛋白的高表達(dá)和腫瘤的耐藥性明顯相關(guān)。 本研究通過三維培養(yǎng)體外藥敏試驗來評估胃腸腫瘤對常用化療藥物的單藥和聯(lián)合用藥的敏感性，與臨床報道相比較，并確立方法學(xué)的可行性；通過測定胃腸腫瘤多藥耐藥基因表達(dá)產(chǎn)物水平，探討其與體外藥敏試驗的相關(guān)性。 第1章胃腸腫瘤三維培養(yǎng)體外藥敏試驗。 目的：通

4、過三維培養(yǎng)體外藥敏試驗來評估胃腸腫瘤對常用化療藥物的單藥和聯(lián)合用藥的敏感性，并確立方法學(xué)的可行性。 方法：收集2007年11月至2008年2月中山大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院40例胃腸腫瘤新鮮手術(shù)標(biāo)本。應(yīng)用三維培養(yǎng)藥敏試驗技術(shù)，評估表阿霉素、順鉑、草酸鉑、5-FU、泰素帝、伊立替康6種單藥和5-Fu+表阿霉素+順鉑、5-FU+伊立替康、5-FU+草酸鉑、5-FU+泰素帝+順鉑4組聯(lián)合用藥的抑制率和敏感率。 結(jié)果：胃癌中，單藥組抑制率

5、和敏感率最高都是5-FU(分別為29.8％和50％)；聯(lián)合用藥組抑制率最高為5-FU+泰素帝+順鉑(59.8％)，敏感率最高為5-FU+表阿霉素+順鉑(77.3％)。腸癌中，單藥組抑制率和敏感率最高都是5-FU(分別為20.7％和38.9％)；聯(lián)合用藥組抑制率最高為5-FU+奧沙利鉑(54.1％)，敏感率最高為5-FU+泰素帝+順鉑(66.7％)。聯(lián)合用藥組抑制率和敏感率均高于單藥組(P<0.05)。 結(jié)論：在單藥組中，抑制率和

6、敏感率最高者均為5-Fu。聯(lián)合用藥組中，胃癌組抑制率和敏感率最高分別為5-FU+泰素帝+順鉑和5-FU+表阿霉素+順鉑；腸癌組抑制率和敏感率最高分別為5-FU+奧沙利鉑和5-FU+泰素帝+順鉑。 第2章腫瘤多藥耐藥基因表達(dá)產(chǎn)物mRNA及蛋白水平分析 目的：通過測定引起胃腸腫瘤原發(fā)耐藥的多藥耐藥基因表達(dá)產(chǎn)物水平，探討其與體外藥敏試驗的相關(guān)性。 方法：應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和免疫組織化學(xué)方法測定此40

7、例胃腸腫瘤MDR1、MRP1、ABCG2的mRNA和蛋白表達(dá)水平。 結(jié)果：MDR1、MRP1、ABCG2蛋白在胃癌中的陽性表達(dá)率分別為36.4％，54.5％，36.4％，在腸癌中的陽性表達(dá)率分別為55.6％，33.3％，50.0％；MDR1、MRP1、ABCG2mRNA在胃癌中陽性表達(dá)率分別為90.9％，54.5％，77.3％，在腸癌中陽性表達(dá)率分別為88.9％，55.6％，67.5％；MDR1、MRP1、ABCG2蛋白高表達(dá)與