鼻咽癌多藥耐藥與放療相關性的研究.pdf

1、目的 研究鼻咽癌細胞株多藥耐藥及多藥耐藥逆轉與鼻咽癌放療敏感性的關系，探討鼻咽癌細胞株體外化療誘導耐藥前后放射治療敏感性的改變，并研究不同耐藥逆轉方法逆轉治療后對耐藥細胞放射治療敏感性的影響；同時研究鼻咽癌細胞株體外分割放射治療前后多藥耐藥表達的改變，及放療后和放療過程中間斷給予逆轉耐藥治療對多藥耐藥表達的影響。同時分析臨床鼻咽癌組織P-gp、GST-π、TOPⅡ和MRP蛋白的表達與病理、臨床分期及放化療近期療效的相關性。

2、 結果 1.MTT法測定不同濃度DDP作用后CNE1、CNE2細胞系的IC50值分別為0.35、0.23μmol/L，CNE1/DDP、CNE2/DDP細胞株的IC50值分別為6.72、4.16μmol/L。CsA對CNE1/DDP和CNE2/DDP細胞的逆轉倍數分別為5.01和9.67倍，IFN對CNE1/DDP和CNE2/DDP細胞的逆轉倍數分別為1.95和2.34倍，CsA+IFN對CNE1/DDP和CNE2/DDP細胞

3、的逆轉倍數分別為6.34和11.89倍。可見，3.0μmol/L環(huán)孢素A、500U/mlIFN單獨、聯(lián)合應用對CNE1/DDP、CNE2/DDP均有逆轉耐藥作用，CsA對CNE1/DDP和CNE2/DDP細胞的逆轉作用明顯優(yōu)于IFN(P＜0.01)，且CsA和IFN聯(lián)用的逆轉作用優(yōu)于CsA、IFN單藥應用的逆轉效果(P＜0.01)?？寺⌒纬蓪嶒烇@示：CNE1/DDP、CNE1/DDP+CsA、CNE1/DDP+IFN、CNE1/DDP+

4、CsA+IFN四組細胞克隆形成率分別為73.67±2.08、73.00±2.65、74.00±2.65、73.33±1.53，方差分析顯示無統(tǒng)計學差異，可見CsA、IFN單獨和聯(lián)合用藥對CNE1/DDP細胞均無細胞毒性；CNE2/DDP、CNE2/DDP+CsA、CNE2/DDP+IFN、CNE2/DDP+CsA+IFN四組細胞克隆形成率分別為69.33±2.52、68.00±2.65、68.67±3.06、68.33±3.79，方差分

5、析顯示無統(tǒng)計學差異，可見CsA、IFN單獨和聯(lián)合用藥對CNE2/DDP細胞均無細胞毒性。 2.單擊多靶模型擬合的細胞存活曲線及放射生物學參數顯示：CNE1細胞的SF2為0.641，CNE1/DDP的SF2為0.686，CsA+IFN逆轉耐藥組的SF2為0.619；CNE2細胞的SF2為0.187，CNE2/DDP細胞的SF2為0.355，CsA+IFN逆轉耐藥組的SF2為0.277?？梢姡珻NE1細胞經DDP誘導耐藥后，放療敏感

6、性無明顯改變，給與CsA+IFN逆轉耐藥處理后放療敏感性亦無明顯改變；CNE2細胞經DDP誘導耐藥后放療敏感性下降，給與CsA+IFN逆轉耐藥處理后放療敏感性有所上升，但是仍然低于親本細胞株。 3.流式細胞術檢測顯示：CNE1細胞MDR1、MRP、GST-π陽性率分別為33.76±3.98、41.92±3.89、53.60±6.28；經過放射治療誘導后MDR1、MRP、GST-π陽性率均較照射前明顯上調(P＜0.01)，分別為6

7、1.12±5.92、58.27±3.81、86.00±5.62；放療誘導耐藥后給與CsA+IFN逆轉耐藥組的MDR1、MRP陽性率較照射組明顯下調(P＜0.01)，分別為38.69±3.86、45.79±3.04，與未照射組相比無顯著差異(P＞0.05)；放療過程中給與CsA+IFN逆轉耐藥組的MDR1、MRP陽性率與照射組相比無明顯差異(P＞0.05)，分別為59.02±2.31、57.43±2.97;放療后逆轉耐藥組、放療中逆轉耐藥

8、組的GST-π陽性率與照射組相比均無顯著差異(P＞0.05)；CNE1細胞TOPⅡ在未照射組、照射組、放療后逆轉耐藥組和放療中逆轉耐藥組的表達均較低，分別為2.91±1.10、1.44±0.75、2.28±1.64、2.45±0.75，四者相比均無顯著差異(P＞0.05)。流式細胞術檢測顯示：CNE2細胞MDR1、MRP、GST-π陽性率分別為16.56±3.17、10.71±0.90、29.80±2.22；經過放射治療誘導后MDR1、

9、MRP、GST-π陽性率均較照射前明顯上調(P＜0.01)，分別為47.99±4.51、45.60±4.32、59.75±4.12；放療誘導耐藥后給與CsA+IFN逆轉耐藥組的MDR1、MRP陽性率較照射組明顯下調(P＜0.01)，分別為19.97±4.57、15.52±4.68，與未照射組相比無顯著差異(P＞0.05)；放療過程中給與CsA+IFN逆轉耐藥組的MDR1、MRP陽性率與照射組相比無明顯差異(P＞0.05)，分別為45.2

10、5±1.43、42.99±4.93；放療后逆轉耐藥組、放療中逆轉耐藥組的GST-π陽性率與照射組相比均無顯著差異(P＞0.05)；CNE2細胞TOPⅡ在未照射組、照射組、放療后逆轉耐藥組和放療中逆轉耐藥組的表達均較低，分別為1.61±0.87、1.89±0.79、2.49±1.34、1.91±0.71，四者相比均無顯著差異(P＞0.05)。RT-PCR顯示，放療后CNE1、CNE2細胞mdr1、MRP、GST-πmRNA水平表達上調，放

11、療后和放療中給與CsA+IFN逆轉耐藥治療對CNE1、CNE2細胞mdr1、MRP、GST-πmRNA水平表達均無逆轉下調作用。TOPⅡmRNA在CNE1、CNE2細胞均表達較低，且逆轉耐藥對TOPⅡmRNA表達無影響。MTT法測定不同濃度DDP作用后CNE1/RT、CNE2/RT、CNE1/RT-C、CNE2/RT-C細胞生長存活率并計算各組的IC50值分別為7.24、6.35、1.08、0.44μmo1/L，從細胞水平證實在放療過程

12、中間斷給與CsA+IFN逆轉耐藥治療可以逆轉放射治療誘導的多藥耐藥，對CNE1/RT、CNE2/RT的逆轉倍數分別為6.70、14.43倍。 4.鼻咽癌組織P-gp、GST-π、TOPⅡ和MRP蛋白表達與病理、臨床分期及放化療近期療效的相關性： P-gp蛋白在角化型細胞癌、未角化型分化細胞癌、未分化型細胞癌中的表達率分別為60.0％、30.8％、11.1％，GST-π在三種病理類型的表達分別為60.0％、69.2％、66

13、.7％，TOPⅡ在在三種病理類型的表達分別為20.0％、30.8％、48.2％，MRP在在三種病理類型的表達分別為40.0％、46.2％、48.2％，統(tǒng)計分析表明：P-gp蛋白的表達與鼻咽癌病理類型相關，而GST-π、TOPⅡ、MRP表達與鼻咽癌組織類型無關。P-gp在臨床Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期的表達分別為33.3％、18.8％、23.5％、22.2％，GST-π則分別為66.7％、62.5％、70.6％、66.7％，TOPⅡ分別為33.3％

14、、43.8％、35.3％、44.4％，MRP分別為0％、43.8％、52.9％、55.6％，統(tǒng)計分析表明：P-gp、GST-π、TOPⅡ、MRP的表達與鼻咽癌臨床分期無關。統(tǒng)計分析表明：P-gp、GST-π、TOPⅡ、MRP的表達與鼻咽癌近期療效不具有相關性。 結論 多藥耐藥與鼻咽癌放療敏感性密切相關。不同病理類型鼻咽癌細胞株經化療誘導耐藥后放療敏感性的改變不同，且逆轉耐藥治療對不同病理類型鼻咽癌細胞耐藥株放療敏感性的改

15、變不同；逆轉耐藥濃度的環(huán)孢素A和IFN無論單藥還是聯(lián)合應用對CNE1/DDP、CNE2/DDP細胞均無明顯的細胞毒作用；放射治療誘導后鼻咽癌細胞株P-gp、MRP、GST-π、TOPⅡ蛋白水平和mRNA水平表達改變不同；P-gp、MRP、GST-π與放射治療誘導鼻咽癌多藥耐藥相關，TOPⅡ與放射治療誘導鼻咽癌多藥耐藥無關；在放療后給與CsA+IFN逆轉耐藥治療可以逆轉鼻咽癌細胞部分多藥耐藥蛋白水平的表達，對多藥耐藥基因mRNA水平的表達