TLR4在特發(fā)性炎癥性肌病中的作用研究.pdf

1、特發(fā)性炎癥性肌?。↖IM）是一組獲得性自身免疫性肌肉機(jī)能障礙疾病，故又稱自身免疫性肌炎。包括多發(fā)性肌炎、皮肌炎、包涵體肌炎、非特異性肌炎和免疫介導(dǎo)的壞死性肌炎5種亞型。其共同的臨床表現(xiàn)多有輕度到重度的肌肉無(wú)力、肌內(nèi)膜炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、肌酸激酶升高、肌電圖異常等。目前臨床治療IIM的藥物副作用大，效果有限，需要療效更好的治療藥物的研發(fā)，那么特發(fā)性肌炎機(jī)制的研究顯得更為必要和重要。
　　Toll樣受體4（TLR4）是Toll蛋白樣受體家族

2、中最重要的成員之一，通過(guò)識(shí)別抗原相關(guān)分子模式（PAMPs）引起有效的免疫反應(yīng)而參與多種炎性、自身免疫性疾病的發(fā)生。TLR4主要激活兩種信號(hào)途徑：MyD88依賴和不依賴，前者通過(guò)激活NF-кB促進(jìn)炎性因子的釋放。一些研究表明TLR4在各種自身免疫性疾病中發(fā)揮重要作用，另有研究顯示TLR4基因敲除小鼠可避免某些自身免疫性疾病的發(fā)生。
　　然而，TLR4在特發(fā)性肌炎中的作用至今國(guó)內(nèi)外研究甚少，故本課題分別研究TLR4在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性肌

3、炎（EAM）模型小鼠中和在多發(fā)性肌炎患者肌肉活檢中的表達(dá)情況，觀察TLR4是否參與特發(fā)性肌炎的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。希望通過(guò)此研究為臨床有效的新藥開(kāi)發(fā)提供思路。
　　目的：
　　研究TLR4、MyD88、NF-κB在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性肌炎小鼠（EAM）和多發(fā)性肌炎患者肌肉活檢中的表達(dá)情況，探討TLR4在特發(fā)性肌炎發(fā)病中的可能作用。
　　方法：
　　實(shí)驗(yàn)一：將30只雌性BALB/c小鼠隨機(jī)分為5組（n=6）：第1組為正常對(duì)照

4、組，其它4組分別為肌炎模型1、2、3、4周處理組，后4組均應(yīng)用肌球蛋白誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性肌炎模型（EAM）。采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)各組小鼠肌肉中TLR4的表達(dá)情況。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)各組小鼠肌肉、淋巴結(jié)及脾臟中TLR4、MyD88、NF-κBmRNA表達(dá)水平。
　　實(shí)驗(yàn)二：將西京醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科2009.4～2011.5收集的根據(jù)ENMC診斷標(biāo)準(zhǔn)確診為多發(fā)性肌炎的17例患者肌肉活檢標(biāo)本作為PM組（n=17），7例非特發(fā)

5、性肌炎表現(xiàn)且組織學(xué)正常的患者肌肉活檢標(biāo)本作為對(duì)照組（n=7）。采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)各組TLR4的表達(dá)情況。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)各組TLR4、MyD88、NF-κBmRNA表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　實(shí)驗(yàn)一：（1）與正常小鼠相比，EAM1-4周各組小鼠肌肉中TLR4表達(dá)均不同程度上調(diào)（P<0.01）。（2）與正常小鼠相比，肌炎各組小鼠肌肉及淋巴結(jié)中TLR4、MyD88、NF-κBmRNA表達(dá)均有不同程度上調(diào)（P<

6、0.01），其中2周組升高最為顯著（P<0.01）。（3）各組肌肉及淋巴結(jié)中TLR4mRNA表達(dá)水平與MyD88mRNA、NF-κBmRNA表達(dá)水平均呈正相關(guān)(P<0.01)，MyD88mRNA表達(dá)水平與NF-κBmRNA表達(dá)水平呈正相關(guān)(P<0.01)。（4）EAM各組小鼠脾臟TLR4mRNA的表達(dá)均低于正常對(duì)照組（P<0.01）；2周組脾臟中MyD88mRNA、NF-κBmRNA的表達(dá)水平均明顯低于正常對(duì)照組（P<0.01）；MyD

7、88mRNA與NF-κBmRNA呈現(xiàn)正相關(guān)（P<0.01）。
　　實(shí)驗(yàn)二：（1）免疫組化結(jié)果顯示：PM肌肉活檢標(biāo)本中TLR4表達(dá)較正常對(duì)照組上調(diào)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.01）。（2）RT-PCR結(jié)果顯示：PM肌肉活檢標(biāo)本中TLR4、MyD88、NF-κBmRNA表達(dá)較正常對(duì)照組上調(diào)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.01）。（3）TLR4mRNA表達(dá)水平與MyD88mRNA、NF-κBmRNA表達(dá)水平均呈正相關(guān)(P<0.01)，MyD88mR