P物質(zhì)參與小鼠中樞內(nèi)源性下行抑制系統(tǒng)鎮(zhèn)痛效應(yīng)的形態(tài)學(xué)研究.pdf

1、延髓吻段腹內(nèi)側(cè)部(RVM) 是中樞內(nèi)源性下行痛抑制系統(tǒng)的一個(gè)重要組成部分，RVM內(nèi)的神經(jīng)元不但接受多個(gè)腦區(qū)的上位調(diào)節(jié)，還向脊髓背角淺層發(fā)出下行投射，參與外周傷害性信息向中樞傳遞的調(diào)控。 動(dòng)物行為學(xué)實(shí)驗(yàn)研究表明，電刺激中縫大核（RMg）可以觀察到動(dòng)物對(duì)熱刺激和機(jī)械性刺激的反應(yīng)降低，反應(yīng)閾值增大，對(duì)傷害性信息的傳遞有抑制作用。破壞RMg對(duì)傷害性信息傳遞的抑制作用降低或消失。RVM內(nèi)神經(jīng)元的活動(dòng)受到多種機(jī)制的調(diào)節(jié)，其中最經(jīng)典的例子就是

2、RVM內(nèi)局部給予嗎啡后觀察到RVM內(nèi)神經(jīng)元的活動(dòng)水平升高，并產(chǎn)生鎮(zhèn)痛效應(yīng)。已經(jīng)證明，多種神經(jīng)活性物質(zhì)和受體均可以通過調(diào)節(jié)RVM內(nèi)向脊髓背角投射的神經(jīng)元參與中樞內(nèi)源性鎮(zhèn)痛，而對(duì)這些物質(zhì)及受體的研究和探討，無疑對(duì)進(jìn)一步揭示中樞內(nèi)源性下行抑制系統(tǒng)發(fā)揮鎮(zhèn)痛效應(yīng)的機(jī)制具有重要的意義。 P物質(zhì)(SP) 是一種重要的，與傷害性信息調(diào)節(jié)相關(guān)的神經(jīng)激肽，主要通過神經(jīng)激肽-1受體(NK-1R) 在中樞發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。盡管SP在外周對(duì)傷害性信息向中樞傳

3、遞的過程中起易化作用，但在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)卻主要發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用。免疫組織化學(xué)研究表明有大量的SP免疫陽性纖維和終末分布于RVM內(nèi)，與該處的神經(jīng)元形成復(fù)雜的突觸聯(lián)系；局部給予SP可以使RVM內(nèi)的神經(jīng)元發(fā)放動(dòng)作電位的頻率升高，這些研究結(jié)果提示SP可能參與了RVM內(nèi)神經(jīng)元活動(dòng)的調(diào)節(jié)。但是，RVM內(nèi)SP能纖維和終末的來源、SP能纖維和終末與NK-1R陽性神經(jīng)元的聯(lián)系及RVM內(nèi)可能受到SP調(diào)節(jié)的NK-1R陽性神經(jīng)元向脊髓背角的下行投射狀況等問題均尚未

4、闡明。 本研究采用免疫熒光組織化學(xué)染色、熒光束路追蹤以及免疫電鏡技術(shù)，觀察了小鼠RVM內(nèi)：①SP能纖維和終末的來源，②SP能終末與NK-1R陽性神經(jīng)元之間的突觸聯(lián)系，③NK-1R陽性神經(jīng)元的下行投射狀況。本研究的結(jié)果將為SP參與中樞內(nèi)源性下行鎮(zhèn)痛系統(tǒng)的機(jī)能活動(dòng)提供形態(tài)學(xué)證據(jù)。 第一部分 延髓吻段腹內(nèi)側(cè)部?jī)?nèi)P物質(zhì)陽性纖維和終末的來源 本研究采用順行、逆行束路追蹤與免疫熒光組織化學(xué)染色相結(jié)合的方法，觀察了分布于RVM

5、 內(nèi)的SP 能纖維和終末的來源部位。 將逆行性束路追蹤劑熒光金（FG）注射到中縫大核（RMg）后，結(jié)合SP 的免疫熒光組織化學(xué)染色，我們觀察到FG 逆行標(biāo)記的SP 陽性神經(jīng)元主要分布于楔形核(CnF)，中縫背核(DR)與中腦導(dǎo)水管周圍灰質(zhì)外側(cè)部(lPAG)。將順行示蹤劑生物素化葡聚糖胺（BDA）注射到相應(yīng)的CnF、DR和lPAG 后，SP、NK-1R 和BDA 的免疫熒光組織化學(xué)三重染色結(jié)果顯示，在RMg 和旁巨細(xì)胞核（Pgi）

6、內(nèi)，BDA 標(biāo)記的SP 陽性終末與表達(dá)NK-1R 的神經(jīng)元形成密切接觸。 結(jié)果提示：RVM 內(nèi)的SP 能纖維和終末主要來源于CnF、DR 和lPAG，SP 能終末能夠與相應(yīng)的表達(dá)NK-1R 的神經(jīng)元細(xì)胞發(fā)生密切接觸，鑒于RVM內(nèi)神經(jīng)元是內(nèi)源性下行抑制系統(tǒng)的主要組成，該結(jié)果從形態(tài)學(xué)上提示了SP參與中樞內(nèi)源性下行痛抑制系統(tǒng)的可能性。 第二部分 中腦導(dǎo)水管周圍灰質(zhì)下行投射的SP 能終末與中縫大核內(nèi)神經(jīng)激肽-1 受體陽性神經(jīng)元的

7、突觸聯(lián)系 本研究采用順行追蹤與免疫組化雙重染色相結(jié)合的三標(biāo)方法，觀察了起源于PAG 的SP 能陽性終末與RMg 內(nèi)NK-1R 陽性神經(jīng)元之間的突觸聯(lián)系。 結(jié)果顯示：將BDA 注入小鼠PAG 的外側(cè)區(qū)后，BDA 順行標(biāo)記終末可見于腦干許多區(qū)域，主要位于RMg 內(nèi)，其中的部分BDA 順行標(biāo)記終末呈SP 陽性。 RMg 內(nèi)可見到散在分布的NK-1R 陽性神經(jīng)元。在電鏡下可見來自PAG 的SP/BDA 雙標(biāo)終末與RMg

8、內(nèi)的NK-1R 陽性神經(jīng)元的胞體和樹突形成以非對(duì)稱性為主的突觸聯(lián)系。 本研究的結(jié)果提示，起源于PAG 的下行投射終末所釋放的SP 可能參與中樞內(nèi)源性鎮(zhèn)痛系統(tǒng)，通過激活RMg 內(nèi)表達(dá)NK-1R 的下行投射神經(jīng)元發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用，在電鏡水平進(jìn)一步證實(shí)了第一部分的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 第三部分 延髓吻段腹內(nèi)側(cè)部?jī)?nèi)神經(jīng)激肽-1 受體陽性神經(jīng)元向脊髓背角的投射 本研究采用FG 逆行束路追蹤和NK-1R 免疫熒光組織化學(xué)相結(jié)合的方法，觀察