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文檔簡介
1、第一部分:小鼠Kupffer細胞、肝竇內(nèi)皮細胞分離、純化、培養(yǎng)和鑒定.目的:建立簡便、有效和穩(wěn)定的大鼠肝Kupffer細胞(Kupffercells,KC)和肝竇內(nèi)皮細胞(sinusoidal endothelial cells,SEC)分離、純化和培養(yǎng)方法.方法:采用膠原酶原位灌注消化干組織;percoll不連續(xù)密度梯度離心;選擇性貼壁純化;經(jīng)免疫組化和掃描電鏡鑒定.結(jié)果:最終獲得小鼠肝Kupffer細胞和SEC產(chǎn)量分別為2.0±0.
2、4*10<'6>/肝,1.1±0.6*106/肝;純度分別為>90％,>75％,細胞活性均大于95％.第二部分:小鼠肝內(nèi)源性損傷下TLRs在Kupfier細胞、肝竇內(nèi)皮細胞中的表達.目的:觀察在小鼠內(nèi)源性損傷模型下肝臟Kupffer細胞和肝竇內(nèi)皮細胞表面Toll樣受體(Toll Like Receptors,TLRs)蛋白及mRNA表達.方法:實驗組建立肝部分缺血/再灌注模型,對照組進行假手術(shù),采用原位灌注消化法分離并純化Kupffer
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