版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、背景:
內(nèi)源性醛類(甲醛、核糖)在機(jī)體內(nèi)維持一定的生理濃度且具有重要的生理功能。內(nèi)源性甲醛作為甲基供體,參與體內(nèi)葉酸循環(huán)、DNA甲基化、表觀遺傳學(xué)修飾、細(xì)胞分化、基因表達(dá)調(diào)控等多種細(xì)胞生物學(xué)過程。內(nèi)源性核糖參與體內(nèi)能量提供物質(zhì)-三磷酸腺苷(ATP)的合成,同時(shí)也是 DNA和 RNA的重要組成部分。當(dāng)體內(nèi)內(nèi)源性甲醛、核糖代謝失調(diào),會(huì)造成機(jī)體認(rèn)知功能損傷。已有實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,隨著老齡化年齡的增加,體內(nèi)甲醛逐漸升高。阿爾茲海默病病人體
2、內(nèi)甲醛與認(rèn)知損傷呈正相關(guān)。甲醛能導(dǎo)致細(xì)胞凋亡、認(rèn)知功能損傷。然而,關(guān)于低濃度甲醛長(zhǎng)時(shí)間處理神經(jīng)細(xì)胞是否會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞功能損傷,形態(tài)改變尚未見文獻(xiàn)報(bào)道。眾所周知,II型糖尿病病人體內(nèi)葡萄糖含量增加,但已有實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示II型糖尿病病人體內(nèi)的核糖含量同樣顯著增加,并且核糖與蛋白質(zhì)發(fā)生非酶促糖基化反應(yīng)的速度顯著快于葡萄糖,產(chǎn)生的糖基化產(chǎn)物(AGEs)具有更強(qiáng)的細(xì)胞毒性。胰島素可以改善學(xué)習(xí)、認(rèn)知損傷,但胰島素能否能挽回核糖產(chǎn)生的糖基化終末產(chǎn)物造成的神
3、經(jīng)細(xì)胞毒性、認(rèn)知功能損傷尚不可知。
目的:
探討低濃度甲醛長(zhǎng)時(shí)間處理神經(jīng)細(xì)胞是否會(huì)出現(xiàn)形態(tài)改變、功能損傷。繼而研究阿爾茲海默病致病機(jī)制并對(duì)其早期預(yù)防、診斷、治療提供理論依據(jù)。探討胰島素是否能挽回核糖代謝失調(diào)導(dǎo)致的細(xì)胞毒性、認(rèn)知功能損傷及可能的作用機(jī)制。
方法:
運(yùn)用連續(xù)傳代的方法,建立甲醛導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)的慢性損傷模型,全息激光成像系統(tǒng),觀察細(xì)胞體積、面積、厚度、粗糙度、橢圓度等形態(tài)變化以及貼壁情況。
4、激光共聚焦顯微鏡觀察甲醛處理原代神經(jīng)元后其樹突、軸突數(shù)目、長(zhǎng)度、復(fù)雜度的變化。運(yùn)用小鼠神經(jīng)母瘤細(xì)胞(N2a)建立核糖細(xì)胞毒性損傷模型,CCK-8檢測(cè)細(xì)胞活力,結(jié)晶紫染色檢測(cè)細(xì)胞數(shù)目,全息激光成像系統(tǒng)檢測(cè)細(xì)胞形態(tài)變化,Western blotting檢測(cè)不同處理組細(xì)胞內(nèi)糖基化終末產(chǎn)物、胰島素受體、胰島素受體磷酸化水平以及 GRP78蛋白表達(dá)變化,細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)AGEs定位以及表達(dá)變化,ThT染色檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)纖維纏結(jié)變化。高效液相色譜
5、檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi)的核糖含量。免疫共沉淀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)胰島素受體與糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)是否有相互作用。采用腹腔注射核糖,建立核糖導(dǎo)致認(rèn)知功能損傷動(dòng)物模型。拉力檢測(cè)小鼠前肢力量,水迷宮、Y迷宮檢測(cè)小鼠學(xué)習(xí)記憶能力,轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)檢測(cè)小鼠平衡能力。Western blotting、免疫組化檢測(cè)各組織內(nèi)糖基化終末產(chǎn)物、胰島素受體、磷酸化胰島素受體、組織蛋白酶-D表達(dá)變化。
結(jié)果:
病理濃度甲醛長(zhǎng)時(shí)間處理神經(jīng)細(xì)胞,會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞變厚、
6、變圓,貼壁能力減弱。同時(shí)使神經(jīng)元突起的一級(jí)結(jié)構(gòu)減少,神經(jīng)連接減少。核糖處理細(xì)胞,細(xì)胞活力隨核糖處理的濃度增加顯著的下降,細(xì)胞的的糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)增加。胰島素通過激活胰島素受體,使胰島素受體磷酸化增加,繼而激活細(xì)胞內(nèi)清除AGEs的途徑,從而挽回核糖處理24h產(chǎn)生的細(xì)胞毒性,使細(xì)胞活力增加、細(xì)胞形態(tài)改變,細(xì)胞內(nèi)AGEs表達(dá)量顯著下降。相同濃度的葡萄糖處理細(xì)胞,細(xì)胞活力與對(duì)照組比較無(wú)明顯變化,胞內(nèi)AGEs也無(wú)變化。長(zhǎng)時(shí)間注射,小鼠的
7、體重增加,但各處理組小鼠增加的速度低于對(duì)照組。在第32天,核糖處理組、核糖加胰島素處理小鼠體重顯著低于對(duì)照組。腹腔注射會(huì)使小鼠的前肢拉力逐漸下降,核糖處理組小鼠下降的速度高于對(duì)照組和其他實(shí)驗(yàn)處理組,并在第20天時(shí)與對(duì)照組存在顯著差異,但結(jié)束給藥后,各處理組小鼠的前肢拉力恢復(fù)到最初狀態(tài),核糖處理組小鼠上升最慢。腹腔注射實(shí)際對(duì)小鼠存在一種損傷,影響小鼠的肌肉能力。各處理組血糖無(wú)明顯變化。運(yùn)用水迷宮、Y迷宮檢測(cè)各處理組小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。水迷
8、宮結(jié)果顯示核糖處理小鼠,小鼠的學(xué)習(xí)能力增加,但隨后的檢測(cè)結(jié)果顯示核糖處理組小鼠的空間記憶能力損傷。Y迷宮結(jié)果提示核糖處理組,小鼠的工作記憶與對(duì)照組相比有損傷,與核糖加胰島素處理組的記憶能力比存在顯著差異。運(yùn)用轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)排除運(yùn)動(dòng)的因素的影響。轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,核糖處理組小鼠的耐力、平衡能力與對(duì)照組沒有變化,但與胰島素組、核糖加胰島素處理組存在顯著差異。蛋白免疫印跡檢測(cè)了各處理組血清中蛋白以及糖基化終末產(chǎn)物的量,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,核糖處理組小鼠血
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 肺內(nèi)源性-外源性因素致急性肺損傷機(jī)制研究.pdf
- 能量代謝的內(nèi)源性熒光表征.pdf
- 內(nèi)源性BDNF促周圍神經(jīng)損傷后再生及其機(jī)制的研究.pdf
- PrP內(nèi)源性心肌保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf
- 丙烯腈對(duì)大鼠內(nèi)源性硫化氫代謝的影響及其機(jī)制研究.pdf
- 慢性壓迫脊髓損傷及其內(nèi)源性保護(hù)機(jī)制的基礎(chǔ)與臨床研究.pdf
- 內(nèi)源性LPS對(duì)奶牛肝臟的炎性損傷與機(jī)理研究.pdf
- 18745.內(nèi)源性硫化氫對(duì)細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)及機(jī)制研究
- 黃芪調(diào)控內(nèi)源性保護(hù)機(jī)制減輕缺氧心肌細(xì)胞氧化損傷的研究.pdf
- 基于內(nèi)源性和外源性熒光分子的腫瘤代謝成像.pdf
- 內(nèi)源性氫化可的松代謝評(píng)價(jià)體內(nèi)CYP3A活性研究.pdf
- 內(nèi)源性CO在褪黑素減輕內(nèi)毒素休克致大鼠急性肺損傷中的作用.pdf
- 原發(fā)性肝細(xì)胞癌中內(nèi)源性脂類代謝研究.pdf
- 基于代謝組學(xué)技術(shù)研究蜂毒對(duì)SD大鼠內(nèi)源性代謝的影響.pdf
- 準(zhǔn)噶爾烏頭對(duì)大鼠內(nèi)源性代謝物的影響.pdf
- 內(nèi)源性H2S在膿毒癥膈肌損傷中的作用及其機(jī)制研究.pdf
- 內(nèi)源性LPS對(duì)奶牛瘤胃與盲腸的炎性損傷機(jī)理.pdf
- 針刺鎮(zhèn)痛機(jī)制中內(nèi)源性SS與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制的研究.pdf
- 內(nèi)源性硫化氫對(duì)硫酸鈹致大鼠肺損傷的保護(hù)作用及其PI3K-Akt依賴機(jī)制.pdf
- 脊髓損傷后內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞的增殖與分化及相關(guān)機(jī)制研究.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論