人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性及治療晚期帕金森病的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景：近來(lái)，有報(bào)道經(jīng)尾靜脈移植間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）治療早期帕金森?。≒D）大鼠和小鼠可明顯改善其異常行為。臨床上PD患者就診時(shí)已處于疾病中、晚期，并且藥物和外科治療可有效控制中期 PD患者的癥狀，因此，MSCs治療PD的主要群體偏向于晚期PD患者。經(jīng)外周靜脈移植MSCs治療晚期PD鮮見(jiàn)研究，為了更加貼近于臨床，我們認(rèn)為MSCs移植治療晚期PD，值得我們研究。
　　目的：研究人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（hUC-MSCs）的生物學(xué)特性及評(píng)

2、估經(jīng)外周靜脈行hUC-MSCs移植治療晚期PD大鼠的療效，為臨床hUC-MSCs移植治療PD提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1.從人臍帶和大鼠骨髓中分離培養(yǎng)間充質(zhì)細(xì)胞，通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞表面抗原，以及成脂、成骨、成軟骨誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)，鑒定分離培養(yǎng)的細(xì)胞是否為MSCs；利用免疫細(xì)胞化學(xué)法和Western Blot法檢測(cè)hUC-MSCs及大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（rBM-MSCs）的神經(jīng)細(xì)胞標(biāo)志表達(dá)情況；
　　2.用6-OH

3、DA立體定位損毀S D大鼠右側(cè)內(nèi)側(cè)前腦束，以阿樸嗎啡誘導(dǎo)的旋轉(zhuǎn)行為、免疫組化檢測(cè)黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元和紋狀體多巴胺能神經(jīng)纖維數(shù)量作為晚期PD大鼠模型的評(píng)價(jià)指標(biāo)；
　　3.造模后第3周將PD大鼠隨機(jī)分為三組：對(duì)照組（經(jīng)尾靜脈輸注1 ml M199培養(yǎng)液）、hUC-MSCs治療組（經(jīng)尾靜脈輸注6 x106 hUC-MSCs）和rBM-MSCs治療組（經(jīng)尾靜脈輸注6 x106 rBM-MSCs）；MSCs移植后第2、4、8、12周檢測(cè)PD

4、大鼠旋轉(zhuǎn)行為的變化，MSCs移植后第12周免疫組化法檢測(cè)大鼠黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元和紋狀體多巴胺能神經(jīng)纖維數(shù)量的變化，評(píng)估hUC-MSCs的療效。
　　結(jié)果：
　　1.人臍帶間充質(zhì)細(xì)胞強(qiáng)表達(dá)CD90、CD29、CD73、CD105，弱表達(dá)CD106，不表達(dá)CD45、CD34及HLA-DR，能夠分化為脂肪細(xì)胞、骨細(xì)胞和軟骨細(xì)胞；表明我們成功分離了hUC-MSCs；
　　2.大鼠骨髓間充質(zhì)細(xì)胞表達(dá)CD29、CD9，不表達(dá)CD4

5、5、CD34，能夠分化為脂肪細(xì)胞、骨細(xì)胞和軟骨細(xì)胞；表明我們成功分離了rBM-MSCs；
　　3.hUC-MSCs和rBM-MSCs均表達(dá)神經(jīng)干細(xì)胞標(biāo)記Nestin、神經(jīng)細(xì)胞標(biāo)記NSE及星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記GFAP，不表達(dá)多巴胺能神經(jīng)元標(biāo)記TH，表明MSCs可能具有向神經(jīng)細(xì)胞方向分化的潛能；
　　4.造模后第3周手術(shù)組大鼠的旋轉(zhuǎn)行為大于6圈/分，黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元和紋狀體多巴胺能神經(jīng)纖維損毀90％以上，符合晚期PD大鼠模型標(biāo)準(zhǔn)；

6、
　　5.MSCs移植后第2、4、8、12周PD大鼠旋轉(zhuǎn)行為無(wú)改善；
　　6.MSCs移植后第12周P D大鼠黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元和紋狀體紋狀體多巴胺能神經(jīng)纖維損傷情況無(wú)改善。
　　結(jié)論：
　　1.hUC-MSCs表面帶有神經(jīng)干細(xì)胞標(biāo)記Nestin、神經(jīng)細(xì)胞標(biāo)記NSE，可能具有向神經(jīng)細(xì)胞方向分化的潛能；
　　2.經(jīng)外周靜脈移植hUC-MSCs治療晚期PD大鼠無(wú)效，建議及早治療或經(jīng)其他途徑行hUC-MSCs移植