多沙唑嗪對(duì)映體對(duì)動(dòng)物胃平滑肌收縮功能及α1受體亞型mRNA表達(dá)的研究.pdf

1、多沙唑嗪，作為長(zhǎng)效的選擇性α1受體阻斷藥，臨床廣泛用于治療高血壓疾病。由于α1受體在下尿路分布廣泛且參與排尿功能的調(diào)節(jié)，因此選擇性α1受體阻斷藥包括多沙唑嗪成為治療良性前列腺增生癥的一線用藥。多沙唑嗪的化學(xué)結(jié)構(gòu)中存在一個(gè)手性碳原子，人們已成功分離出多沙唑嗪對(duì)映體（左旋多沙唑嗪和右旋多沙唑嗪）。而目前臨床使用的為其外消旋體，且臨床使用多沙唑嗪為口服劑型，其在吸收入血前可在胃局部形成較高濃度。預(yù)實(shí)驗(yàn)我們發(fā)現(xiàn)多沙唑嗪可明顯增強(qiáng)5-HT誘發(fā)兔離

2、體胃體縱行平滑肌的收縮反應(yīng)。而機(jī)體95％的5-HT分布于胃腸道內(nèi)，在胃平滑肌中分布了5-HT1B，5-HT1D和5-HT2B等受體亞型參與調(diào)節(jié)胃腸功能。同時(shí)，目前關(guān)于α1受體亞型（α1A，α1B，α1D）在胃平滑肌內(nèi)的分布報(bào)道甚少，并且在長(zhǎng)期口服多沙唑嗪后對(duì)胃平滑肌中可能存在的α1受體亞型的影響尚無報(bào)道。
　　 因此，本研究目的:1）研究多沙唑嗪及其對(duì)映體對(duì)5-HT誘發(fā)的兔離體胃體縱肌收縮反應(yīng)的作用機(jī)制，進(jìn)一步對(duì)5-HT誘發(fā)收縮

3、反應(yīng)的亞型分析;2）研究?jī)H1受體及其亞型mRNA在大鼠胃平滑肌中表達(dá)分布特點(diǎn);3)觀察長(zhǎng)期給予多沙唑嗪對(duì)大鼠胃平滑肌中α1受體及其亞型mRNA表達(dá)水平的影響。
　　 第一部分:多沙唑嗪選擇性增強(qiáng)5-HT誘發(fā)兔胃體縱肌收縮反應(yīng)及其反應(yīng)機(jī)制的研究
　　 制備兔離體胃體縱行平滑肌標(biāo)本，標(biāo)本施予2g前負(fù)荷，平衡1h后給藥。標(biāo)本對(duì)藥物反應(yīng)通過生理記錄儀記錄。
　　 1.吲哚美辛及阿托品對(duì)5-HT誘發(fā)兔胃體縱行平滑肌收縮反應(yīng)

4、的影響
　　 溶媒對(duì)照組中，5-HT重復(fù)給藥3次均可產(chǎn)生相同的收縮反應(yīng)量效曲線(P＞0.05)，第2輪與第3輪量效曲線的Emax與-LogEC50均無顯著差異（P＞0.05）。
　　 1μmol·L-1阿托品處理標(biāo)本后，5-HT誘發(fā)的兔胃體縱行平滑肌收縮反應(yīng)無明顯變化，處理后5-HT反應(yīng)量效曲線Emax與-LogEC50與處理前均無顯著差異(P＞0.05)。
　　 然而，10μmol·L-1吲哚美辛可以顯著抑制5

5、-HT誘發(fā)的收縮反應(yīng)，抑制比率可達(dá)95.16±2.01％(P＜0.05)，但對(duì)5-HT誘發(fā)的收縮反應(yīng)量效曲線-LogEC50無顯著影響(P＞0.05)。
　　 2.不同5-HT受體亞型阻斷劑對(duì)5-HT誘發(fā)兔胃體縱行平滑肌收縮反應(yīng)的影響
　　 溶媒對(duì)照組中，5-HT可誘發(fā)產(chǎn)生5輪均相同的收縮反應(yīng)量效曲線（P＞0.05），第2、3、4、5輪量效曲線Emax與-LogEC50均無顯著變化(P＞0.05)。
　　 5-H

6、T3受體阻斷劑昂丹司瓊(3-30μmol·L-1)及5-HT2B受體阻斷劑育亨賓（1-10μmol·L-1）處理標(biāo)本后，5-HT誘發(fā)的兔胃體縱行平滑肌收縮反應(yīng)量效曲線Emax與-LogEC50與給藥前比較均無顯著差異(P＞0.05)。
　　 然而，選擇性5-HT2A受體阻斷劑萘法唑酮(1，10，100nmol·L-1)處理標(biāo)本后，5-HT誘發(fā)的兔胃體縱行平滑肌收縮反應(yīng)量效曲線平行右移，而Emax值無顯著變化(P＞0.05)，Sc

7、hild作圖法計(jì)算斜率值為0.982±0.099，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析符合競(jìng)爭(zhēng)性拮抗，pA2=8.643±0.175。
　　 3.5-HT受體激動(dòng)劑及促胃動(dòng)素激動(dòng)劑對(duì)兔胃體縱行平滑肌的作用
　　 分別加入5-HT1A受體激動(dòng)劑烏拉地爾（0.1-3μmol·L-1）或促胃動(dòng)素受體激動(dòng)劑紅霉素（0.1-10μmol·L-1），標(biāo)本張力均無顯著性變化（P＞0.05），即兩種激動(dòng)劑均未使兔胃體縱行平滑肌誘發(fā)顯著的收縮反應(yīng)(P＞0.05)

8、。
　　 第二部分:α1受體三種亞型mRNA在大鼠胃不同部位平滑肌表達(dá)水平的研究
　　 利用熒光實(shí)時(shí)定量PCR方法對(duì)大鼠賁門、胃底、胃體、胃竇平滑肌中α1受體亞型(α1A，α1B，α1D)mRNA表達(dá)水平進(jìn)行相對(duì)定量。
　　 1.大鼠賁門、胃底、胃體、胃竇四個(gè)不同部位平滑肌α1A受體mRNA表達(dá)水平的對(duì)比分析
　　 以大鼠脾組織作為陽性對(duì)照，賁門、胃底、胃體和胃竇α1A受體mRNA的表達(dá)水平均顯著低于脾組

9、織(P＜0.05)，且這四個(gè)不同部位之間α1A受體mRNA表達(dá)水平亦不相同，胃底與胃體平滑肌組織α1A受體mRNA的表達(dá)水平相對(duì)較高，賁門、胃竇α1A受體mRNA表達(dá)水平顯著低于胃體平滑肌組織（P＜0.05）。四個(gè)部位胃平滑肌中mRNA表達(dá)水平依次為:賁門=胃竇＜胃底=胃體。
　　 2.大鼠賁門、胃底、胃體、胃竇四個(gè)不同部位平滑肌α1B受體mRNA表達(dá)水平的對(duì)比分析
　　 以大鼠脾組織作為陽性對(duì)照，賁門、胃底、胃體和胃竇

10、α1B受體mRNA的表達(dá)水平均顯著低于脾組織(P＜0.01)，但賁門、胃底、胃體及胃竇四個(gè)不同部位平滑肌組織之間α1B受體mRNA表達(dá)水平無顯著性差異（P＞0.05）。
　　 3.大鼠賁門、胃底、胃體、胃竇四個(gè)不同部位平滑肌α1D受體mRNA表達(dá)水平的對(duì)比分析
　　 以大鼠胸主動(dòng)脈作為陽性對(duì)照，賁門、胃底、胃體平滑肌組織α1D受體mRNA的表達(dá)水平均顯著低于胸主動(dòng)脈(P＜0.01)，但胃竇平滑肌組織中α1D受體mRNA表

11、達(dá)水平較胸主動(dòng)脈比較無顯著性差異(P＞0.05)。且賁門、胃底、胃體平滑肌組織1D受體mRNA的表達(dá)水平均顯著低于胃竇平滑肌組織(P＜0.01)。賁門平滑肌組織α1D受體mRNA的表達(dá)水平亦低于胃體平滑肌組織（P＜0.05）。四個(gè)部位表達(dá)水平依次為:賁門＜胃底=胃體＜＜胃竇。
　　 第三部分:長(zhǎng)期給予多沙唑嗪對(duì)大鼠胃平滑肌中α1受體亞型mRNA表達(dá)水平的影響
　　 大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、消旋多沙唑嗪（（±）DOX）組、左旋

12、多沙唑嗪((-)DOX)組及右旋多沙唑嗪((+)DOX)組。三組給藥組采用灌胃方式分別給予大鼠消旋多沙唑嗪、左旋多沙唑嗪、右旋多沙唑嗪8mg/kg/d，對(duì)照組以蒸餾水替代藥物。持續(xù)給藥12w后，處死大鼠，利用熒光實(shí)時(shí)定量PCR方法分別對(duì)四組大鼠賁門、胃底、胃體、胃竇平滑肌中α1受體亞型(α1A，α1B，α1D)mRNA表達(dá)水平進(jìn)行相對(duì)定量。
　　 1.多沙唑嗪及其對(duì)映體對(duì)大鼠賁門平滑肌α1A、α1B、、1D受體mRNA表達(dá)水平的

13、影響
　　 與對(duì)照組標(biāo)本相比，（±）DOX組、(+)DOX組、(-)DOX組三組給藥組賁門平滑肌標(biāo)本α1A受體mRNA的表達(dá)水平均顯著升高（P＜0.01），且(±)DOX組賁門平滑肌標(biāo)本α1A受體mRNA表達(dá)水平高于(+)DOX組和(-)DOX組(P＜0.05)。
　　 （±）DOX組、(+)DOX組、(-)DOX組三組給藥組賁門平滑肌標(biāo)本α1B受體mRNA的表達(dá)水平與對(duì)照組標(biāo)本相比無顯著性差異（P＞0.05）。

14、　　 （±）DOX組和(+)DOX組賁門平滑肌標(biāo)本1D受體mRNA的表達(dá)水平較對(duì)照組標(biāo)本顯著升高(P＜0.01)。而(-)DOX組賁門平滑肌標(biāo)本α1D受體mRNA的表達(dá)水平與對(duì)照組相比無明顯差異(P＞0.05)。
　　 2.多沙唑嗪及其對(duì)映體對(duì)大鼠胃底平滑肌α1A、α1B、1D受體mRNA表達(dá)水平的影響
　　 與對(duì)照組標(biāo)本相比，（±）DOX組、(+)DOX組和(-)DOX組三組給藥組胃底平滑肌標(biāo)本α1A受體mRNA的表

15、達(dá)水平均顯著升高(P＜0.01)，且（±）DOX組胃底平滑肌標(biāo)本α1A受體mRNA表達(dá)水平略高于(+)DOX組和(-)DOX組，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 （±）DOX組、(+)DOX組、(-)DOX組三組給藥組胃底平滑肌標(biāo)本α1B受體mRNA的表達(dá)水平與對(duì)照組標(biāo)本比較無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 （±）DOX組、(+)DOX組和(-)DOX組胃底平滑肌標(biāo)本α1D受體mRNA的表達(dá)水平均較對(duì)照組標(biāo)本略有下降(P＜0.

16、05）。但三組給藥組標(biāo)本之間α1D受體mRNA表達(dá)水平無顯著差異(P＞0.05)。
　　 3.多沙唑嗪及其對(duì)映體對(duì)大鼠胃體平滑肌α1A、α1B、α1D受體mRNA表達(dá)水平的影響
　　 與對(duì)照組標(biāo)本相比，（±）DOX組、(+)DOX組和(-)DOX組三組給藥組胃體平滑肌標(biāo)本α1A受體mRNA的表達(dá)水平均顯著升高(P＜0.01)，且三組給藥組間比較，(+)DOX組胃體平滑肌標(biāo)本α1A受體mRNA表達(dá)水平略低于（±）DOX組和

17、(-)DOX組(P＜0.05)。
　　 （±）DOX組、(+)DOX組、(-)DOX組三組給藥組標(biāo)本α1B受體mRNA的表達(dá)水平與對(duì)照組標(biāo)本比較無顯著性差異（P＞0.05）。
　　 (-)DOX組胃體平滑肌標(biāo)本α1D受體mRNA的表達(dá)水平較對(duì)照組標(biāo)本略有下降(P＜0.05），而(±)DOX組和(+)DOX組標(biāo)本僅1D受體mRNA表達(dá)水平較對(duì)照組無顯著差異(P＞0.05)。
　　 4.多沙唑嗪及其對(duì)映體對(duì)大鼠胃竇平

18、滑肌α1A、α1B、1D受體mRNA表達(dá)水平的影響
　　 與對(duì)照組標(biāo)本相比，（±）DOX組、(+)DOX組和(-)DOX組三組給藥組胃竇平滑肌標(biāo)本α1A受體mRNA的表達(dá)水平均顯著升高(P＜0.01)，且三組給藥組間比較，(+)DOX組胃竇平滑肌標(biāo)本α1A受體mRNA表達(dá)水平略低于（±）DOX組和(-)DOX組(P＜0.05)。
　　 （±）DOX組、(+)DOX組、(-)DOX組三組給藥組胃竇平滑肌標(biāo)本α1B受體mRN

19、A的表達(dá)水平與對(duì)照組比較無顯著性差異（P＞0.05）。
　　 （±）DOX組、(+)DOX組和(-)DOX組三組給藥組標(biāo)本α1D受體mRNA的表達(dá)水平與對(duì)照組標(biāo)本相比無顯著性差異（P＞0.05）。
　　 結(jié)論:
　　 較高濃度多沙唑嗪及其對(duì)映體均可對(duì)5-HT受體介導(dǎo)的兔離體胃體縱行平滑肌收縮作用產(chǎn)生非α1受體依賴性的特異性增強(qiáng)效應(yīng)，(+)DOX與(-)DOX對(duì)5-HT誘發(fā)的兔胃體縱肌收縮反應(yīng)的增強(qiáng)效應(yīng)無顯著差異。

20、喹唑啉類α1受體阻斷藥中的哌唑嗪、阿夫唑嗪和特拉唑嗪均不具有多沙唑嗪樣增強(qiáng)效果。5-HT通過5-HT2A受體亞型誘發(fā)兔離體胃體縱行平滑肌收縮反應(yīng)，并且此收縮作用與前列腺素合成存在密切聯(lián)系。
　　 α1A，α1B，α1D三種受體亞型mRNA在大鼠胃平滑肌均有表達(dá)，但表達(dá)水平各不相同。α1A受體mRNA在胃底與胃體平滑肌中的表達(dá)水平明顯高于賁門及胃竇平滑肌，α1D受體mRNA在賁門、胃底、胃體、胃竇平滑肌中表達(dá)水平依次升高，而僅1B