多沙唑嗪及其光學(xué)異構(gòu)體對大鼠主動脈平滑肌細(xì)胞增殖周期和細(xì)胞凋亡影響的實驗研究.pdf

1、動脈粥樣硬化（AS）是危害人類健康的主要疾病。近年來本病的發(fā)生率在我國有明顯增加的趨勢。而經(jīng)皮冠狀動脈腔內(nèi)成形術(shù)（percutaneous coronary transluminal angioplasty PTCA）術(shù)后再狹窄（RS）一直是其存在的棘手問題。兩者均伴有血管平滑肌細(xì)胞（vascular smooth muscle cells，VSMCs）的增殖。細(xì)胞周期是細(xì)胞增殖的最后通道。許多研究表明，細(xì)胞凋亡在血管重塑、AS和RS中

2、扮演了越來越重要的角色。VSMCs的過度增殖和凋亡不足既是AS斑塊形成的主要病理基礎(chǔ)，也是PTCA術(shù)后再狹窄形成的重要因素。因此，調(diào)節(jié)VSMCs凋亡可能成為抗AS、預(yù)防PTCA術(shù)后再狹窄的一種途徑。多沙唑嗪（racemic-doxazosin，（±）Doxazosin）是一種高選擇性的α1受體阻斷劑，已有試驗表明，多沙唑嗪可能有防止RS形成的作用。但其心血管意外事件發(fā)生率較高，目前利用HPLC技術(shù)對（±）doxazosin進(jìn)行手性拆分，

3、可制備其單一光學(xué)異構(gòu)體（-）doxazosin和（+）doxazosin。我們前期的研究表明，（±）doxazosin及其光學(xué)異構(gòu)體對大鼠主動脈VSMCs具有抗增殖作用，且該抑制作用具有化學(xué)結(jié)構(gòu)的立體選擇性；其機(jī)制與阻斷α1受體無關(guān)。在本研究中，我們應(yīng)用Giemsa染色法及流式細(xì)胞儀（FCM）技術(shù)，探討（±）doxazosin及其光學(xué)異構(gòu)體抑制大鼠主動脈VSMCs增殖的機(jī)制。
　　 目的：體外培養(yǎng)大鼠主動脈VSMCs，觀察（-）

4、doxazosin、（+）doxazosin和（±）doxazosin對VSMCs細(xì)胞周期與凋亡的影響，探討（±）doxazosin及其光學(xué)異構(gòu)體抗VSMCs增殖的機(jī)制。
　　 方法：體外培養(yǎng)Sprague-Dawley（S-D）大鼠主動脈VSMCs，經(jīng)傳代及同步化后，分別給予濃度為30μmol·L-1和25μmol·L-1（-）doxazosin、（+）doxazosin和（±）doxazosin，在無菌培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)96 h和

5、72 h，應(yīng)用Giemsa染色法觀察細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化；應(yīng)用流式細(xì)胞儀（FCM）檢測細(xì)胞增殖周期、凋亡率及Bcl-2、Bax蛋白。
　　 結(jié)果
　　 1（±）Doxazosin及其光學(xué)異構(gòu)體對VSMCs細(xì)胞增殖周期的影響
　　 VSMCs細(xì)胞經(jīng)（-）doxazosin、（+）doxazosin和（±）doxazosin處理72 h后，增殖周期時相分布和增殖指數(shù)發(fā)生了改變。與溶媒組比較，（-）doxazosin和

6、（±）doxazosin組G0/G1期細(xì)胞均顯著增多（P<0.01），S期細(xì)胞、G2/M期細(xì)胞和增殖指數(shù)均顯著減少或降低（P<0.01），而（+）doxazosin組僅S期細(xì)胞顯著減少（P<0.01）。與（-）doxazosin組比較，（+）doxazosin組G0/G1期細(xì)胞顯著降低（P<0.01），S期細(xì)胞、G2/M期細(xì)胞和增殖指數(shù)均顯著增多或增高（P<0.05～0.01）。而（+）doxazosin處理組各期細(xì)胞均無顯著性差異。<

7、br>　　 2（±）Doxazosin及其光學(xué)異構(gòu)體對大鼠主動脈VSMCs凋亡率的影響
　　 （-）Doxazosin、（+）doxazosin和（±）doxazosin作用于大鼠主動脈VSMCs96 h，細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察三種藥物均對VSMCs表現(xiàn)出細(xì)胞凋亡的特征，且（-）doxazosin強(qiáng)于（+）doxazosin，與（±）doxazosin變化不大。利用FCM上機(jī)測得（-）doxazosin、（+）doxazosin和（±

8、）doxazosin作用于VSMCs72 h的凋亡率分別為6.06±0.31％、1.36±0.30％和3.63±0.99％。與溶媒組相比較，（-）doxazosin和（±）doxazosin均可誘導(dǎo)VSMCs凋亡（P<0.01），而（+）doxazosin不具有促進(jìn)VSMCs凋亡的作用。（-）doxazosin的作用明顯高于（+）doxazosin和（±）doxazosin（P<0.01）。
　　 3（±）Doxazosin及其

9、光學(xué)異構(gòu)體對大鼠主動脈VSMCs凋亡蛋白Bcl-2、Bax的影響
　　 （-）Doxazosin、（+）doxazosin和（±）doxazosin作用于大鼠VSMCs72 h，利用FCM上機(jī)測得（-）doxazosin、（+）doxazosin和（±）doxazosin對VSMCs內(nèi)Bcl-2蛋白的熒光指數(shù)（Fluorescence Index，F(xiàn)I）分別為10.83±4.30、9.50±1.22和8.53±2.20。Bax蛋

10、白的FI值依次為15.77±6.00、10.33±1.12和10.30±1.83。與各溶媒對照組相比較，實驗組細(xì)胞內(nèi)的Bcl-2和Bax蛋白含量無顯著性差異（P>0.05）。
　　 4（±）Doxazosin及其光學(xué)異構(gòu)體對大鼠主動脈VSMCs內(nèi)Bcl-2/Bax的蛋白比值的影響
　　 VSMCs經(jīng)（-）doxazosin、（+）doxazosin和（±）doxazosin處理72 h后，Bcl-2/Bax蛋白比值分別為

11、0.68±0.01、0.92±0.03和0.82±0.10。與溶媒對照組（0.99±0.06）相比較，（-）doxazosin和（±）doxazosin均顯著降低Bcl-2/Bax的蛋白比值（P<0.01和P<0.05），而（+）doxazosin不影響VSMCs的Bcl-2/Bax蛋白比值（P>0.05）。與（+）doxazosin相比，（-）doxazosin明顯降低Bcl-2/Bax蛋白比值（P<0.01）。
　　 結(jié)論：