粟米草甾體皂甙對體外SD大鼠胸主動脈平滑肌細(xì)胞增殖、遷移以及膠原蛋白合成的影響.pdf

1、目的：探討粟米草甾體皂甙（Mollugo pentaphylla）對SD大鼠胸主動脈平滑肌細(xì)胞（Rat Aortic Smooth Muscle Cells，RASMC）增殖、遷移以及膠原蛋白合成的影響。 方法：采用組織塊貼壁培養(yǎng)法原代培養(yǎng)SD大鼠胸主動脈平滑肌細(xì)胞，選用第5代VSMC作為實驗對象。實驗按以下分組：①空白對照組（含10％ FBS培養(yǎng)液）；②溶劑對照組（含1％DMSO+10％ FBS培養(yǎng)液）；③不同濃度的粟米草甾體

2、皂甙組（1、3、9、27μmol/L粟米草甾體皂甙孵育60min后加入10％FBS）。采用四甲基偶氮唑藍(lán)（MTT）法觀察不同濃度的粟米草甾體皂甙對VSMC增殖，選用細(xì)胞刮片法觀察不同濃度的粟米草甾體皂甙對VSMC遷移的影響，選用比色法觀察不同濃度的粟米草甾體皂甙對VSMC的羥脯氨酸含量的影響。 結(jié)果：（1）VSMC的鑒定：通過倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞呈梭形或長梭形，細(xì)胞經(jīng)抗α-actin抗體檢測后，光鏡下可見細(xì)胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)黃褐色顆

3、粒，呈陽性，而對照組呈陰性，細(xì)胞胞漿內(nèi)未見黃褐色顆粒。光鏡和免疫細(xì)胞化學(xué)法鑒定，均證實成功培養(yǎng)出大鼠VSMC，且純度較高。 （2）MTT法檢測不同濃度粟米草甾體皂甙藥物組對VSMC增殖的影響：與溶劑對照組和空白對照組相比，1μmol/L粟米草甾體皂甙藥物組的VSMC吸光度OD值雖有增加，在72h時，與空白對照組相比抑制率為22.7％，但無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）；與空白對照組相比，濃度分別為3、9、27μmol/L粟米草甾體皂

4、甙藥物組的吸光值度OD值均較低，在72h時，VSMC增殖抑制最明顯，其增殖的抑制率分別為42.8％（P<0.01）、62.4％（P<0.01）、69.7％（P<0.01）。MTT法結(jié)果顯示，粟米草甾體皂甙能抑制VSMC的增殖，具有濃度依賴性。 （3）細(xì)胞刮片法檢測不同濃度粟米草甾體皂甙藥物組對VSMC遷移的影響：細(xì)胞刮片法顯示空白對照組VSMC遷移距離明顯增加，與溶劑對照組相比無顯著性差異（P>0.05）；1、3、9、27μmo

5、l/L粟米草甾體皂甙藥物組與空白對照組相比VSMC遷移距離減少，有顯著性差異（P>0.05），細(xì)胞遷移抑制率分別為4.4％（P<0.05～0.01）、12.4％（P<0.01）、20.5％（P<0.01）和33.7％（P<0.01）。細(xì)胞刮片法結(jié)果表明：粟米草甾體皂甙能明顯抑制VSMC遷移，具有濃度依賴性。 （4）比色法檢測不同濃度粟米草甾體皂甙藥物組對VSMC羥脯氨酸合成的影響：與空白對照組和溶劑對照組相比，粟米草甾體皂甙低濃