多沙唑嗪光學異構(gòu)體對大鼠血管平滑肌細胞增殖與凋亡的影響及其作用機制的實驗研究.pdf

1、血管平滑肌細胞（VSMCs）位于血管中膜，生理條件下，VSMCs通過收縮和舒張調(diào)節(jié)血管張力。VSMCs由中膜遷移到內(nèi)膜下間隙并異常增殖是動脈粥樣硬化（AS）、高血壓和血管再狹窄（RS）等疾病共同的細胞病理基礎(chǔ)之一。血管內(nèi)皮細胞損傷導致多種炎癥因子和生長調(diào)節(jié)因子的表達和激活紊亂，誘導VSMCs發(fā)生表型改變，刺激VSMCs從血管中膜向內(nèi)膜下間隙遷移，發(fā)生過度增生和凋亡抑制，從而導致血管壁結(jié)構(gòu)改變。因此，血管內(nèi)皮細胞損傷、VSMCs增殖與遷移

2、及其表型改變是目前研究新生內(nèi)膜形成和再狹窄的熱點。
　　 多沙唑嗪[（±）doxazosin]屬長效α1受體阻斷藥，臨床廣泛用于治療良性前列腺增生（BPH）并發(fā)下尿路癥狀（U5TS）；對于BPH/LUTS合并高血壓的患者，應(yīng)用（±）doxazosin可獲得雙重效果。近年來，國內(nèi)外研究表明，（+）doxazosin具有抑制主動脈VSMCs增殖的作用，該抑制作用具有濃度依賴性和α1受體非依賴性等特點。
　　 本研究中，采用M

3、TT比色法檢測細胞增殖活性，采用流式細胞技術(shù)檢測細胞增殖周期、凋亡率及凋亡蛋白（Bcl-2和Bax），探討（-）doxazosin、（+）doxazosin和（+）doxazosin對體外培養(yǎng)大鼠主動脈VSMCs的增殖與凋亡的影響并分析其作用機制。
　　 第一部分多沙唑嗪光學異構(gòu)體對大鼠主動脈平滑肌細胞增殖的影響及與α1受體相關(guān)性的實驗研究
　　 觀察（±）doxazosin及其光學異構(gòu)體對大鼠VSMCs增殖的影響。在培

4、養(yǎng)的大鼠主動脈VSMCs，采用MTT比色法檢測細胞增殖活性，探討（-）doxazosin、（+）doxazosin和（+）doxazosin的抗大鼠主動脈VSMCs的增殖作用以及與α1受體的相關(guān)性。
　　 1.(±）Doxazosin及其光學異構(gòu)體對VSMCs增殖的影響。
　　 2.（±）Doxazosin及其光學異構(gòu)體的非α1受體依賴性抗VSMCs增殖作用。
　　 3.（±）Doxazosin及光學異構(gòu)體α1受

5、體依賴性抗VSMCs增殖作用。
　　 第二部分多沙唑嗪光學異構(gòu)體對大鼠主動脈平滑肌細胞增殖周期和凋亡的影響
　　 本研究觀察（±）doxazosin及其光學異構(gòu)體對體外培養(yǎng)的大鼠胸主動脈VSMCs增殖周期和細胞凋亡的影響。應(yīng)用Giemsa染色觀察細胞形態(tài)學改變，采用FCM測定細胞周期、細胞凋亡率和凋亡蛋白（Bcl-2和Bax）。探討（±）doxazosin及其光學異構(gòu)體抗VSMCs增殖的機制。
　　 1.（±）D

6、oxazosin及其光學異構(gòu)體對VSMCs的形態(tài)學影響。
　　 2.（±）Doxazosin及其光學異構(gòu)體對VSMCs細胞增殖周期的影響。
　　 3.（±）Doxazosin及其光學異構(gòu)體對VSMCs凋亡率的影響。
　　 4.（±）Doxazosin及其光學異構(gòu)體對VSMCs中Bcl-2蛋白和Bax蛋白表達的影響。
　　 第三部分多沙唑嗪光學異構(gòu)體對多種促增殖因子誘導大鼠主動脈平滑肌細胞增殖的影響

7、　　 本研究采用MTT比色法測定細胞增殖活性，觀察了（±）doxazosin）及其光學異構(gòu)體對血小板源生長因子（FDGF-BB）、血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）、凝血酶和高糖誘導的大鼠主動脈VSMCs增殖的影響。
　　 1.（±）Doxazosin及其光學異構(gòu)體對PDGF-BB誘發(fā)VSMCs增殖的影響。
　　 2.（±）Doxazosin及其光學異構(gòu)體對AngⅡ誘發(fā)VSMCs增殖的影響。
　　 3.（±）Doxazo

8、sin及其光學異構(gòu)體對凝血酶誘發(fā)VSMCs增殖的影響。
　　 4.（±）Doxazosin及其光學異構(gòu)體對高糖誘發(fā)VSMCs增殖的影響。
　　 結(jié)論:
　　 1.（-）Doxazosin、（+）doxazosin和（±）doxazosin均可抑制10％小牛血清DMEM液中大鼠胸主動脈VSMCs的增殖反應(yīng)；其中，（-）doxazosin的抑制作用明顯強于（+）doxazosin，提示doxazosin在該培養(yǎng)條件下

9、的抗VSMCs增殖作用具有手性藥理學差異。
　　 2.除α1受體非依賴性抗VSMCs增殖作用以外，（-）doxazosin、（+）doxazosin和（±）doxazosin也具有α1受體依賴性抗VSMCs增殖作用。
　　 3.（-）Doxazosin和（±）doxazosin抗大鼠胸主動脈VSMCs增殖的作用與其抑制G0/G1期細胞向S期轉(zhuǎn)化以及降低細胞增殖指數(shù)有關(guān)；（+）doxazosin的對細胞周期的抑制作用顯著弱

10、于（-）doxazosin。
　　 4.（-）Doxazosin和（±）doxazosin具有誘導大鼠胸主動脈VSMCs凋亡的作用，該作用與其調(diào)控Bcl-2蛋白/Bax蛋白比值有關(guān)；提示（±）doxazosin誘導VSMCs凋亡的物質(zhì)基礎(chǔ)是其光學異構(gòu)體（-）doxazosin而非（+）doxazosin。
　　 5.（±）Doxazosin）及其光學異構(gòu)體對PDGF-BB、AngⅡ、凝血酶和高糖誘發(fā)大鼠主動脈VSMCs增