Thr307Ala、Asn680Ser基因多態(tài)性與卵巢刺激反應(yīng)差異的相關(guān)性及機(jī)制研究.pdf

1、研究目的:研究FSHR基因單核苷酸多態(tài)性Thr307Ala和Asn680Ser在中國(guó)漢族不孕癥女性人群中的分布特征，探討該遺傳多態(tài)性對(duì)FSH刺激后卵巢反應(yīng)的影響，并研究其與OHSS的關(guān)系;研究FSHR基因單核苷酸多態(tài)性Thr307Ala和Ser680Asn影響FSH刺激后卵巢反應(yīng)的具體分子機(jī)制，并探討這些多態(tài)是否影響FSHR的表達(dá)和功能。
　　研究方法:采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(polymerase chain r

2、eaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)對(duì)450名不孕癥女性患者進(jìn)行FSHR基因Thr307Ala和Asn680Ser位點(diǎn)的基因型分析，檢測(cè)月經(jīng)第三天基礎(chǔ)FSH水平、基礎(chǔ)雌激素水平和基礎(chǔ)LH水平;檢測(cè)醋酸曲普瑞林控釋注射劑降調(diào)節(jié)后的FSH水平、雌激素水平和LH水平;檢測(cè)絨毛膜促性腺激素給藥日的雌激素水平、LH水平和孕酮水平，陰道B超檢查月經(jīng)第三天基礎(chǔ)竇卵泡數(shù)量、

3、絨毛膜促性腺激素給藥日卵泡數(shù)和排卵前卵泡數(shù)，B超引導(dǎo)經(jīng)陰道穿刺取卵并記錄獲卵數(shù)。所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用PHASE軟件進(jìn)行單倍型分析;應(yīng)用Haploview軟件進(jìn)行連鎖不平衡分析;應(yīng)用方差分析、卡方檢驗(yàn)和多元logistic回歸分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。體外使用定點(diǎn)誘變的方法構(gòu)建不同基因型FSHR真核表達(dá)載體，并以HEK293細(xì)胞為模型建立野生型和不同突變型FSHR穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株。然后，分別利用半定量Real-Time PCR和Western Blo

4、tting技術(shù)檢測(cè)上述多態(tài)是否影響FSHR的表達(dá)。最后，用ELISA檢測(cè)上述突變對(duì)FSHR所介導(dǎo)cAMP水平的影響。
　　研究結(jié)果:
　　1.FSHR基因Thr307Ala位點(diǎn)突變型AA（GG基因型）組的基礎(chǔ)FSH(mIU/ml)水平[7.38±2.07 vs6.34±1.75，6.63±1.94，P＜0.05，95％CI(6.75，8.01)]顯著高于野生型TT（AA基因型）和突變雜合子型TA（AG基因型）組，且AA組的刺

5、激天數(shù)顯著高于TT和TA組;Ser680Asn位點(diǎn)突變型SS(GG基因型)組的基礎(chǔ)FSH(mIU/mL)水平[7.51±2.01 vs6.31±1.75，6.66±1.96，P＜0.05，95％ CI(6.88，8.15)]顯著高于野生型NN（AA基因型）和突變雜合子型NS(AG基因型)組，且SS組的刺激天數(shù)顯著高于NN和NS組。
　　2.使用FSH后，攜帶FSHR基因Thr307Ala位點(diǎn)AA組和Ser680Asn位點(diǎn)SS組的不

6、孕癥女性患者發(fā)生卵巢低反應(yīng)的比例均顯著高于其他組，然而307和680位點(diǎn)基因型與OHSS的發(fā)生無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.FSHR基因Thr307Ala和Ser680Asn多態(tài)性位點(diǎn)連鎖不平衡分析顯示D'=0.95，r2=0.84，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4.FSHR Thr307Ala和Ser680Asn基因多態(tài)性在HEK293細(xì)胞系中不影響FSHR mRNA和蛋白表達(dá)水平，并且不同基因多態(tài)性在HEK293細(xì)胞系中對(duì)cAMP的分泌