鞘內(nèi)注射不同劑量雷帕霉素對糖尿病神經(jīng)病理性疼痛大鼠機(jī)械痛閾和脊髓mTOR-S6K表達(dá)的影響.pdf

1、目的：觀察糖尿病大鼠脊髓雷帕霉素靶蛋白(mTOR)在痛覺敏化過程中表達(dá)的變化，以及鞘內(nèi)注射不同劑量雷帕霉素對糖尿病神經(jīng)病理性疼痛(DNP)大鼠機(jī)械痛閾和脊髓mTOR、S6K表達(dá)的影響，探討mTOR在DNP發(fā)病機(jī)制中的重要作用。
　　方法：取40只180-220g SD大鼠，隨機(jī)分成對照組（C組，n=20）和糖尿病組（D組，n=20），C組腹腔注射枸櫞酸-枸櫞酸鈉緩沖液6ml/kg作為造模對照，D組腹腔注射鏈脲霉素(60mg/kg)

2、行糖尿病造模。于第造模前、造模后每3天測定機(jī)械痛閾，造模后3天及每周測定大鼠體重血糖至第四周;并且于造模前、造模后1、2、3、4周分別取4只大鼠脊髓腰膨大組織，應(yīng)用Western Blotting技術(shù)檢測脊髓mTOR及p-mTOR表達(dá)的變化;
　　另取鞘內(nèi)置管成功的SD大鼠30只，隨機(jī)分成5組每組6只，正常對照組(NC組)腹腔注射枸櫞酸-枸櫞酸鈉緩沖液6ml/kg作為造模對照，糖尿病溶劑對照組(DV組)、糖尿病雷帕霉素1μg組（D

3、R1組）、糖尿病雷帕霉素3μg組（DR3組）、糖尿病雷帕霉素10μg組（DR10組）均腹腔注射鏈脲霉素(60mg/kg)行DNP造模。DR1、DR3、DR10組鞘內(nèi)注射預(yù)定量的雷帕霉素(預(yù)定劑量的雷帕霉素溶于10μl4％DMSO)，NC、DV組鞘內(nèi)注射10μl4％DMSO，所有組均采用15μl生理鹽水沖管，于第四周開始治療，連續(xù)治療7天。鞘內(nèi)置管前、糖尿病造模前、造模后1周、2周、3周、治療后1天、3天、5天、7天測定機(jī)械痛闡，血糖與體

4、重測量同第一部分。最后一次行為學(xué)測試結(jié)束后，脫臼處死大鼠，取脊髓腰膨大組織WesternBlotting技術(shù)檢測mTOR、p-mTOR、S6K、p-S6K蛋白的表達(dá)變化，RT-PCR技術(shù)檢測mTOR、S6K mRNA表達(dá)變化。
　　結(jié)果：1.糖尿病大鼠機(jī)械痛閾及mTOR蛋白表達(dá)的變化:與造模前或C組比較，D組機(jī)械痛閾于造模后9天開始下降，于造模后21天下降到最低點(diǎn)，并穩(wěn)定于這一狀態(tài)(P＜0.01);相對于同周齡正常大鼠，與造模前比

5、較，糖尿病大鼠脊髓mTOR在造模后2周開始升高，而p-mTOR在造模后1周開始增高，并且均在造模后3-4周顯著增高(P＜0.01)。
　　2.鞘內(nèi)注射不同劑量雷帕霉素對DNP大鼠機(jī)械痛閾和脊髓mTOR、S6K表達(dá)的影響:與造模前比較，DV、DR1、DR3、DR10組在造模后3周MWT顯著減低(p＜0.01);而雷帕霉素治療7天后，DR1、DR3、DR10組MWT顯著高于DV組，且MWT DR10組高于DR1組(p＜0.01)。與N

6、C組比較，DV組mTOR、S6K mRNA、mTOR、S6K蛋白及其磷酸化產(chǎn)物表達(dá)顯著增高(p＜0.01)。與DV組比較，DR1、DR3、DR10組mTOR、S6K mRNA、mTOR、S6K蛋白及其磷酸化產(chǎn)物顯著降低，且其表達(dá)在DR1、DR3、DR10三組依次降低，兩兩比較差異有顯著性(p＜0.05或p＜0.01)。
　　結(jié)論：1.大鼠脊髓mTOR上調(diào)并活化可能是糖尿病神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)病機(jī)制之一。2.鞘內(nèi)注射雷帕霉素抑制mTO