巨噬細(xì)胞功能相關(guān)基因與環(huán)境因素在肺結(jié)核病中作用的流行病學(xué)研究.pdf

1、背景:大量研究已經(jīng)證實(shí)結(jié)核病的發(fā)生、發(fā)展與宿主遺傳因素和環(huán)境因素的共同作用相關(guān)，同時(shí)大量遺傳易感性相關(guān)基因（如HLA、VDR、NRAMP1、SP110、IFN—γ、TLR2、IL-12RB1等）及傳統(tǒng)宏觀因素（吸煙、經(jīng)濟(jì)狀況、通風(fēng)、BCG接種史、病人接觸史等）與結(jié)核病的相關(guān)性已經(jīng)被認(rèn)識(shí)。但現(xiàn)代流行病學(xué)病因模型認(rèn)為，這些影響結(jié)核病發(fā)生發(fā)展的基因、環(huán)境因素間除外單獨(dú)作用，還存在大量基因-基因、基因-環(huán)境因素以及環(huán)境因素間的相互作用，僅考慮某

2、個(gè)（些）因素與結(jié)核病之間的關(guān)系，難以真正闡明結(jié)核病病因和發(fā)病機(jī)制，但目前相關(guān)多基因、多環(huán)境因素間的交互作用在結(jié)核病發(fā)生、發(fā)展中影響的研究相對(duì)缺乏。
　　結(jié)核分枝桿菌(MTB)在人體內(nèi)以有菌細(xì)胞免疫為主，巨噬細(xì)胞是MTB最主要的宿主細(xì)胞和效應(yīng)細(xì)胞，其活性和功能對(duì)于MTB的免疫應(yīng)答以及感染后的轉(zhuǎn)歸起著十分關(guān)鍵的作用。因此，可影響巨噬細(xì)胞功能、活性的相關(guān)基因VDR、NRAMP1和SP110等基因備受關(guān)注，探討這三個(gè)基因和環(huán)境因素在結(jié)核病

3、發(fā)生中的交互作用，對(duì)于理解認(rèn)識(shí)其病因有重要意義。
　　大量流行病學(xué)研究和系統(tǒng)評(píng)價(jià)結(jié)果顯示，遺傳因素存在顯著地區(qū)和人群差異。在中國(guó)人群中，VDR-Fok(I)（ff）、NRAMP1-3'UTR(TGTG+-)與結(jié)核病存在較穩(wěn)定且較強(qiáng)的聯(lián)系（OR≥2.0，95％CI下限大于1）。目前關(guān)于SP110基因與結(jié)核病易感性相關(guān)性研究為數(shù)尚不多，且報(bào)道的結(jié)論并不一致，對(duì)此進(jìn)行的系統(tǒng)評(píng)價(jià)也未發(fā)現(xiàn)SP110基因與結(jié)核病的明顯關(guān)聯(lián)，結(jié)果并不像當(dāng)初設(shè)想

4、。推測(cè)可能與SNP多態(tài)性位點(diǎn)檢測(cè)覆蓋不全、相關(guān)研究對(duì)象數(shù)量不夠等有關(guān)。
　　綜上所述，本研究第一部分將采用傳統(tǒng)病例對(duì)照研究方法，擴(kuò)大檢測(cè)SP1l0基因SNP位點(diǎn)數(shù)量，采用靈敏度、特異度均較高的高分辨熔解曲線分析技術(shù)(high-resolutionmeltinganalysis，HRM)檢測(cè)SNPs，以進(jìn)一步明確或驗(yàn)證本地區(qū)SP110基因多態(tài)性與結(jié)核病的關(guān)聯(lián)性，并為第二步研究交互作用評(píng)價(jià)位點(diǎn)的選擇提供依據(jù)。第二部分將采用單純病例研究

5、方法，結(jié)合前期研究結(jié)果，選擇被大多數(shù)研究認(rèn)可與結(jié)核病相關(guān)的環(huán)境因素（吸煙、結(jié)核病病例接觸史、居室經(jīng)常通風(fēng)等）和易感基因位點(diǎn)(VDR-Fok(I)、NRAMP1-3'UTR以及SP110基因位點(diǎn)），重點(diǎn)探討它們間的交互作用，為進(jìn)一步認(rèn)識(shí)、理解結(jié)核病病因和機(jī)制及深入研究奠定基礎(chǔ)。
　　第一部分SP110基因多態(tài)性與肺結(jié)核病關(guān)聯(lián)的病例對(duì)照研究
　　研究方法:以重慶市結(jié)核病防治所和重慶市沙坪壩區(qū)疾病預(yù)防控制中心（結(jié)核病防治所）連續(xù)收

6、集的新確診的肺結(jié)核病病例作為病例組（排除伴其他傳染病和腫瘤等慢性疾病患者）;以獻(xiàn)血中心、體檢中心同期收集的健康成人作為對(duì)照組，要求年齡和性別與病例組成組匹配。每個(gè)對(duì)象均采用面對(duì)面詢問(wèn)方式填寫調(diào)查表，提取全血基因組DNA，并采用HRM方法進(jìn)行SP110基因20個(gè)位點(diǎn)多態(tài)性檢測(cè)。最終完成所有信息收集、標(biāo)本檢測(cè)的病例和對(duì)照分別為198和195人。
　　主要結(jié)果與結(jié)論:1.人均年收入（少與8000元）、結(jié)核病患者接觸史、吸煙（被動(dòng)吸煙）、

7、人居平均面積（小于10m2）、居室不通風(fēng)、工作強(qiáng)度（偏重）是本地區(qū)結(jié)核病發(fā)生的危險(xiǎn)因素（OR值及OR95％CI下限均大于1）;未見(jiàn)卡介苗(BCG)接種史和睡眠時(shí)間長(zhǎng)短與結(jié)核病間的明顯相關(guān)性(P＞0.05)。2.SP110基因20個(gè)位點(diǎn)中，未檢測(cè)出sp110int10的多態(tài)性。3.rs722555G/G、rs1135791C/T和rs2114592T/T可能是本地區(qū)結(jié)核病發(fā)生的危險(xiǎn)因素（OR值及OR95％CI下限均大于1）。4.rs722

8、555G/G、吸煙、結(jié)核病患者接觸史進(jìn)入多因素非條件logistic回歸模型，各因素OR值及OR95％CI值與因素單獨(dú)存在時(shí)有明顯差異，這三個(gè)因素可能是本地區(qū)結(jié)核病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，同時(shí)相互間存在一定的交互作用。
　　第二部分VDR、NRAMP1、SP110基因與環(huán)境因素在肺結(jié)核病中交互作用的單純病例研究
　　研究方法:在重慶市結(jié)核病防治所和重慶市沙坪壩區(qū)疾病預(yù)防控制中心（結(jié)核病防治所）連續(xù)收集新確診、居住本地10年以上的肺結(jié)

9、核病病例組成研究對(duì)象。每個(gè)對(duì)象均面對(duì)面調(diào)查結(jié)核病主要相關(guān)因素（吸煙、結(jié)核病病例接觸史、居室經(jīng)常通風(fēng)等）暴露情況，并采用高分辨熔解曲線分析(high-resolutionmeltinganalysis，HRM)方法檢測(cè)VDR-Fok(I)、NRAMP1-3'UTR以及SP110基因rs722555多態(tài)性。最終完成所有信息收集和標(biāo)本檢測(cè)的病例共426人納入分析。把具備某一個(gè)環(huán)境因素（或基因型）的病例作為“病例組”，而其他病例作為“對(duì)照組”，

10、計(jì)算P值、OR值及OR95％CI以評(píng)價(jià)相互間的交互作用。
　　主要結(jié)果與結(jié)論:1.426名病例年齡、性別等基本特征與一般病例類似。2.rs722555、VDR-Fok(I)和NRAMP1-3'UTR基因型分布符合遺傳平衡狀態(tài)（Hardy-Weinberg檢驗(yàn)）。3.rs722555(G/G)與吸煙和結(jié)核病病例接觸史、VDR-Fok(I)(ff)與吸煙、居室不通風(fēng)和結(jié)核病病例接觸史以及NRAMP1-3'UTR(TGTG+/-)與吸煙