鐙骨切除術(shù)對(duì)豚鼠聽(tīng)力影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、[研究背景] 鐙骨切除術(shù)已在臨床廣泛應(yīng)用于耳硬化癥引起的傳導(dǎo)性聾治療，國(guó)內(nèi)外許多臨床資料回顧性研究結(jié)果均顯示鐙骨足板全切術(shù)在治療耳硬化癥后可出現(xiàn)高頻聽(tīng)力損失，而小窗活塞型人工鐙骨術(shù)在減少術(shù)后并發(fā)癥、改善聽(tīng)力方面較其它人工鐙骨術(shù)有一定的優(yōu)越性。但目前尚沒(méi)有完善詳細(xì)的關(guān)于鐙骨切除術(shù)對(duì)豚鼠聽(tīng)力影響的實(shí)驗(yàn)資料。豚鼠耳生理及解剖雖然與人類(lèi)似，但尚有一些不同之處，主要是：1)豚鼠的聽(tīng)骨鏈?zhǔn)怯慑N砧復(fù)合體和鐙骨組成，聽(tīng)骨較小、足板較薄，術(shù)中易損

2、傷或斷裂；2)鐙骨與周?chē)匾Y(jié)構(gòu)之間的空間狹小，尤其是與面神經(jīng)、水平半規(guī)管距離小。針對(duì)豚鼠的上述顳骨解剖特點(diǎn)，采用何種麻醉、手術(shù)及相關(guān)聽(tīng)力學(xué)檢查方法，建立一個(gè)理想的鐙骨切除術(shù)模型對(duì)于研究鐙骨切除術(shù)對(duì)聽(tīng)力的影響是至關(guān)重要的。有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，豚鼠作為耳科學(xué)常選的研究對(duì)象，由于其免疫力低下、進(jìn)行手術(shù)或聽(tīng)力檢查不配合，發(fā)生麻醉意外死亡、術(shù)后感染及手術(shù)并發(fā)癥等實(shí)驗(yàn)干擾因素的幾率增加，從而影響實(shí)驗(yàn)研究的順利完成。因此，首先探討最適的麻醉劑劑量及濃度、

3、最佳的手術(shù)方式及預(yù)防術(shù)后并發(fā)癥發(fā)生的應(yīng)對(duì)措施是必要的。對(duì)術(shù)前具備正常聽(tīng)力的豚鼠進(jìn)行鐙骨切除術(shù)研究，其術(shù)后聽(tīng)力必然較術(shù)前有所下降，這不同于臨床資料的分析結(jié)果，而通過(guò)分析豚鼠術(shù)后聽(tīng)力的改變，探討其影響因素，可為進(jìn)一步比較不同術(shù)式的鐙骨切除術(shù)對(duì)豚鼠聽(tīng)力影響的實(shí)驗(yàn)研究提供基本依據(jù)。有文獻(xiàn)報(bào)道，鐙骨切除術(shù)后的豚鼠聽(tīng)力有一定程度的下降，但僅簡(jiǎn)單提供了聽(tīng)閾指標(biāo)方面的改變。本實(shí)驗(yàn)旨在通過(guò)ABR測(cè)試方法，記錄包括反應(yīng)閾在內(nèi)的各種指標(biāo)，為鐙骨切除術(shù)的動(dòng)物實(shí)

4、驗(yàn)研究提供更詳盡的聽(tīng)力資料，同時(shí)建立一個(gè)較完善的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?[研究目的] 研究鐙骨切除術(shù)對(duì)豚鼠聽(tīng)功能及形態(tài)學(xué)的影響，探討建立鐙骨切除術(shù)動(dòng)物模型的可行性及對(duì)聽(tīng)功能改變的影響因素，為進(jìn)一步進(jìn)行鐙骨足板全切與足板不同直徑開(kāi)窗對(duì)豚鼠聽(tīng)力影響的實(shí)驗(yàn)研究提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)；同時(shí)，回顧性分析臨床耳硬化癥資料，比較鐙骨切除術(shù)不同術(shù)式間的療效差異，為動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究提供一定的臨床依據(jù)。 [材料方法] (一)實(shí)驗(yàn)對(duì)象動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

5、研究：健康雜色豚鼠，體質(zhì)量為300-400g，雌雄不限，耳廓反射靈敏，鼓膜完整、標(biāo)志清楚(二級(jí)、南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)。臨床實(shí)驗(yàn)研究：選擇1993年至2004年期間由三位高級(jí)耳科醫(yī)師進(jìn)行鐙骨全切除術(shù)和足板小孔開(kāi)窗術(shù)治療的耳硬化癥病人73例(82耳)，排除由其他術(shù)式失敗、作為二次手術(shù)的病例3例、采用皮質(zhì)骨重建聽(tīng)骨鏈的病例5例、術(shù)中發(fā)現(xiàn)聽(tīng)骨畸形2例、發(fā)生鐙井噴1例，選定73耳。 (二)實(shí)驗(yàn)方法 1豚鼠鐙骨切除

6、術(shù)模型的建立 1.1不同劑量、濃度戊巴比妥鈉對(duì)豚鼠麻醉效果的比較16只(32耳)豚鼠按隨機(jī)數(shù)字法完全隨機(jī)分為4組，每組4只(8耳)，分別按3％戊巴比妥鈉(40mg/Kg)、3％戊巴比妥鈉(30mg/Kg)、1％戊巴比妥鈉(40mg/Kg)、1％戊巴比妥鈉(30mg/Kg)麻醉劑量分為1、2、3、4組。實(shí)驗(yàn)前8h豚鼠禁食、禁水，重復(fù)進(jìn)行3次麻醉，時(shí)間間隔為24h，將隨機(jī)分組后的豚鼠分別給予相應(yīng)的麻醉劑量，采用腹腔注射麻醉，于每次麻

7、醉后進(jìn)行ABR測(cè)試。觀察指標(biāo)：1)麻醉指標(biāo)：體質(zhì)量、誘導(dǎo)時(shí)間、維持時(shí)間、麻醉前及維持期呼吸頻率，2)聽(tīng)力指標(biāo)：雙耳ABR反應(yīng)閾、各波潛伏期及波間期，3)記錄每次麻醉后各組豚鼠死亡例數(shù)。 1.2豚鼠鼓室解剖研究選定5只(10耳)豚鼠。予1％戊巴比妥鈉(30mg/kg)腹腔注射麻醉后，行耳后切口，分離皮下、顳肌，充分暴露顳骨，逐層解剖、測(cè)量各指標(biāo)并照相。測(cè)量后處死豚鼠，取出顳骨，測(cè)量離體鐙骨各指標(biāo)。測(cè)量指標(biāo)：1)活體指標(biāo)：砧鐙關(guān)節(jié)與

8、面神經(jīng)管前緣、砧鐙關(guān)節(jié)與圓窗龕上緣、鐙骨頭下緣與錐隆起、面神經(jīng)管前緣與圓窗龕上緣、前庭窗下緣與圓窗上緣、面神經(jīng)管上緣與水平半規(guī)管下緣之間的垂直距離；2)離體聽(tīng)骨指標(biāo)：鐙骨高度(鐙骨頭上緣與足板間的距離)、足板邊緣及中央部厚度、足板長(zhǎng)徑及短徑。 1.3豚鼠鐙骨切除術(shù)的模型建立5只(10耳)豚鼠隨機(jī)編號(hào)，左耳作為手術(shù)耳，右耳為空白對(duì)照耳。1％戊巴比妥鈉(30mg/kg)腹腔注射豚鼠麻醉后，耳后切口，分離皮下、顳肌，充分暴露顳骨，聽(tīng)泡

9、入路，切斷面神經(jīng)，暴露砧鐙關(guān)節(jié)、鐙骨足板和卵圓窗，取出鐙骨，顳肌筋膜封閉卵圓窗，植入自制Teflon小柱作為人工鐙骨。觀察指標(biāo)：1)術(shù)中豚鼠麻醉狀態(tài)；2)手術(shù)時(shí)間；3)電鉆使用總時(shí)間；4)術(shù)后眩暈發(fā)生率；5)術(shù)后死亡例數(shù)：觀察、記錄術(shù)后3天內(nèi)各組豚鼠死亡例數(shù)；6)眼部感染情況。 2鐙骨切除術(shù)對(duì)豚鼠聽(tīng)力的影響按隨機(jī)數(shù)字法將24只(48耳)豚鼠分為兩組、每組12只。選定左耳為手術(shù)耳，分別進(jìn)行暴露砧鐙關(guān)節(jié)手術(shù)(1組)，鐙骨切除、人工鐙

10、骨植入術(shù)(2組)，每組豚鼠分別依次編號(hào)；進(jìn)行ABR測(cè)試；分別于術(shù)后1小時(shí)、術(shù)后1天各組中隨機(jī)抽出4只豚鼠，在ABR測(cè)試結(jié)束后斷頭處死，取出左側(cè)顳骨，其中，2耳行耳蝸中軸切片，2耳行掃描電鏡檢查。觀察指標(biāo)：1)聽(tīng)力指標(biāo)：ABR反應(yīng)閾(以波Ⅱ?yàn)榕袛嘀笜?biāo))、各波潛伏期及波間期；2)耳蝸中軸切片指標(biāo)：觀察耳蝸螺旋管內(nèi)螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的形態(tài)及數(shù)量；3)耳蝸掃描電鏡指標(biāo)：觀察耳蝸毛細(xì)胞、支持細(xì)胞形態(tài)。 3足板小孔開(kāi)窗與鐙骨全切除術(shù)的臨床療效分

11、析將患耳按術(shù)式分為兩組：鐙骨全切除術(shù)組(TF組)43耳，足板小孔開(kāi)窗術(shù)組(SF組)30耳。分析指標(biāo)：1)言語(yǔ)平均純音聽(tīng)閾(言語(yǔ)PTA)；2)1000、2000和4000Hz的均值作為高頻平均純音聽(tīng)閾(高頻PTA)；3)術(shù)后聽(tīng)力損失(SNHL)；4)術(shù)后氣骨導(dǎo)差分布；5)術(shù)后眩暈反應(yīng)。 (三)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法所有數(shù)據(jù)均采用SPSS10.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。兩組均數(shù)比較用獨(dú)立樣本t-test，各組內(nèi)均數(shù)比較用配對(duì)t-test，；多組間

12、均數(shù)比較用oneway-ANOVA,多重比較：方差齊性用LSD法，方差不齊用Dunnett'sT3；兩組率的比較用χ2檢驗(yàn)；等級(jí)資料的比較分析用非參數(shù)的秩和檢驗(yàn)(Mann-WhitneyTest)；不同時(shí)間重復(fù)測(cè)量指標(biāo)比較用重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)的方差分析；不同時(shí)間各組均數(shù)比較用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)的22析因設(shè)計(jì)分析。所有統(tǒng)計(jì)分析均為雙側(cè)檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。 [結(jié)論] 1.對(duì)豚鼠腹腔注射1％戊巴比妥鈉(30mg/Kg)可以達(dá)

13、到較理想的麻醉效果，而且可以重復(fù)麻醉至少三次，均不影響作為實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)指標(biāo)的ABR測(cè)試結(jié)果。因此，對(duì)進(jìn)行鐙骨切除術(shù)對(duì)豚鼠聽(tīng)力影響的實(shí)驗(yàn)研究而言，1％戊巴比妥鈉(30mg/Kg)腹腔注射麻醉豚鼠是最佳的劑量。 2.豚鼠具有與人耳類(lèi)似的鼓室結(jié)構(gòu)，打開(kāi)聽(tīng)泡即可暴露砧鐙關(guān)節(jié)、鐙骨足板，磨除面神經(jīng)管可充分暴露鐙骨足板及卵圓窗；聽(tīng)骨小，鐙骨與周?chē)匾Y(jié)構(gòu)之間的空間狹小，在進(jìn)行鐙骨切除術(shù)時(shí)必須謹(jǐn)慎操作，選擇更精細(xì)的顯微器械。 3.用1％戊

14、巴比妥鈉(30mg/kg)腹腔注射麻醉豚鼠，采取耳后切口聽(tīng)泡入路、Teflon小柱(長(zhǎng)1.4mm、直經(jīng)0.5mm)作為人工鐙骨、顳肌筋膜封閉卵圓窗、磨除面神經(jīng)管同時(shí)切斷面神經(jīng)，控制使用電鉆時(shí)間不超過(guò)60分鐘、間斷短時(shí)操作，術(shù)中謹(jǐn)慎操作，避免損傷半規(guī)管、圓窗，對(duì)術(shù)側(cè)眼予眼瞼縫合術(shù)，術(shù)后常規(guī)使用氯霉素預(yù)防感染，即可建立一個(gè)理想的鐙骨切除術(shù)豚鼠模型。 4.鐙骨切除術(shù)可引起豚鼠聽(tīng)力的輕度損失，對(duì)耳蝸功能的影響小。引起聽(tīng)力損失的主要原因在