抗結(jié)核藥物作用機(jī)制及作用靶點的研究.pdf

1、本研究為抗結(jié)核藥物的作用靶點及作用機(jī)制的研究，分為兩個部分。第一部分研究了吡嗪酰胺抗結(jié)核桿菌的作用機(jī)理，第二部分著重于反義技術(shù)抑制結(jié)核菌株H37Ra生長的研究。 吡嗪酰胺是一種非傳統(tǒng)的抗結(jié)核桿菌一線藥物，它在體內(nèi)有較高的抗菌活性，但是在體外的抗菌活性不佳。由于PZA能夠殺死半休眠狀態(tài)的結(jié)核桿菌，而其它藥物則不能，這使得PZA在縮短9-12個月療程到現(xiàn)有的6個月療程上發(fā)揮著獨特的作用。正是由于PZA的這些特性使得對于PZA的作用機(jī)

2、理研究成為熱點。然而，由于PZA的特殊性質(zhì)，PZA的作用機(jī)理，作用靶點還不清楚。本實驗研究了營養(yǎng)饑餓處理過程對于PZA抗結(jié)核桿菌作用的影響，我們還研究了脂肪酸、苯甲酸和水楊酸對PZA抗菌活性的影響。結(jié)果表明營養(yǎng)饑餓的處理過程破壞了結(jié)核桿菌的膜電位，從而有利于PZA的抗菌作用。PZA對經(jīng)過5天和10天的營養(yǎng)饑餓過程的結(jié)核桿菌有更強(qiáng)的殺菌效果。脂肪酸、苯甲酸和水楊酸對于正常生長的和營養(yǎng)饑餓后的結(jié)核桿菌都有促進(jìn)PZA抗菌效果的作用，對于營養(yǎng)饑

3、餓后的結(jié)核桿菌作用更明顯。這些結(jié)果為PZA的抗菌作用機(jī)理提供了新的視點，為進(jìn)一步研究PZA的抗菌作用機(jī)理和有效開發(fā)抗結(jié)核新藥提供一定的理論基礎(chǔ)。 反義寡核苷酸作為一種新型的藥物，可以用于特異性地抑制基因表達(dá)，目前已經(jīng)用于對多種疾病地治療研究。肌醇是真核細(xì)胞中一種重要的多聚醇，存在于鏈霉菌屬和分枝桿菌屬中。肌醇在分枝桿菌中被用于合成分枝硫醇，分枝硫醇在分枝桿菌的氧化應(yīng)激反應(yīng)中發(fā)揮重要的作用，對細(xì)菌的生長和毒力具有重要意義。在本實驗

4、中，我們選定編碼肌醇-1-磷酸合成酶的ino1基因為靶基因，使用RNASTRUCTUREANALYSIS軟件對ino1基因序列的二級結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析，根據(jù)序列的自由能及其自身成環(huán)的可能性，最終確定了四個硫代反義寡核苷酸的靶位點。根據(jù)確定的序列讓基因公司合成修飾后的硫代寡核苷酸。將硫代修飾后的反義寡核苷酸通過作用于編碼肌醇-1-磷酸合成酶的ino1基因，使結(jié)核桿菌中肌醇的合成受到抑制。對結(jié)核桿菌進(jìn)行了體外生長抑制實驗，對相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行了檢測。結(jié)