以細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)分子為靶點(diǎn)的抗腫瘤藥物篩選及作用機(jī)制初步研究.pdf

1、當(dāng)前國(guó)內(nèi)外已研究的抗腫瘤藥眾多，但療效不夠高，毒副反應(yīng)大。繼續(xù)尋找高效低毒、高選擇性的抗腫瘤藥物，仍是研究的熱點(diǎn)。分子靶向抗腫瘤藥物的研制很廣泛，但已進(jìn)入臨床應(yīng)用的為數(shù)不多。 ERK MAPKs信號(hào)傳導(dǎo)途徑在癌癥的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用。本工作以ERK MAPKs信號(hào)傳導(dǎo)通路作為靶標(biāo)，篩選高選擇性的抗腫瘤化合物，測(cè)定化合物抑制腫瘤細(xì)胞增殖的能力，進(jìn)行作用機(jī)制研究，為創(chuàng)制出新的高活性、高選擇性抗腫瘤藥物提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 實(shí)

2、驗(yàn)將不同濃度的化合物作用于人前列腺癌細(xì)胞PC3和小鼠成纖維細(xì)胞NIH3T3，若干時(shí)間后，分別采用Western Blot(WB，免疫印跡)、Immunoprecipitation(IP，免疫沉淀)和In Vitro(細(xì)胞體外)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，測(cè)定化合物對(duì)細(xì)胞ERK MAPKs信息傳導(dǎo)通路的抑制活性，確定它們作用的靶蛋白，研究其作用機(jī)制。同時(shí)采用MTT(噻唑蘭)、SRB(Sulforhodamine B，磺酰羅丹明B)方法，測(cè)定化合對(duì)腫瘤細(xì)胞的

3、增殖抑制活性。 本文的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，喹唑啉類化合物A001，A003，A007，A010和A011都是有效的ERK MAPKs信號(hào)傳導(dǎo)抑制劑。A007的效濃度為5μM，其余化合物的有效濃度均為0.5gM，5個(gè)化合物在小于10min的時(shí)間內(nèi)即可發(fā)揮抑制作用，具有較好的生物活性。Western Blot和Immunoprecipitation試驗(yàn)結(jié)果表明5個(gè)化合物的作用靶標(biāo)蛋白為EGFR(Epidermal Growth Facto

4、r Receptor，表皮生長(zhǎng)因子受體)。細(xì)胞的in vitro實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)了化合物對(duì)EGFR的抑制作用是一個(gè)正向調(diào)控的過程，即直接抑制EGFR的磷酸化而不是上調(diào)去磷酸酶的去磷酸化活性的過程。 化合物GuTu01能有效抑制PDGF誘導(dǎo)的細(xì)胞蛋白磷酸化，其對(duì)細(xì)胞的增殖抑制可能是通過抑制細(xì)胞的PDGFR(Platelet Derived Growth Factor Receptor，血小板源生長(zhǎng)因子受體)磷酸化，進(jìn)而抑制其下游蛋白磷

5、酸化，阻斷細(xì)胞信息傳導(dǎo)來(lái)實(shí)現(xiàn)的。GuTu01對(duì)細(xì)胞Erk1/2磷酸化的抑制作用表現(xiàn)在10μM濃度。MTT和SRB試驗(yàn)結(jié)果說明了GuTu01對(duì)人前列腺癌細(xì)胞Pc3的Ic<,50>為0.53μM，對(duì)人胃癌細(xì)胞BGC823的Ic<,50>為0.93μM，姜黃素對(duì)PC3細(xì)胞的IC<,50>為2.0μM，GuTu01優(yōu)于姜黃素。 從大黃中提取的單體化合物05071(大黃素)對(duì)EGF誘導(dǎo)的Erk1/2蛋白磷酸化有抑制作用，但對(duì)PDGF誘導(dǎo)的