復(fù)方甲亢片對甲亢大鼠合并心臟病變的影響及其作用機理研究.pdf

1、目的通過采用灌胃法誘導(dǎo)建立甲亢大鼠合并心臟病變的模型，運用生化、電鏡、高效液相色譜法、逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈法(RT-PCR)，檢測高甲狀腺素水平下，大鼠心肌結(jié)構(gòu)、超微結(jié)構(gòu)、生理功能、激素水平、細(xì)胞因子、病理基因，確定造模的可靠性。使用復(fù)方甲亢片、純中藥、甲巰咪唑等進(jìn)行干預(yù)，比較三種藥物的療效，從而得出結(jié)論。探索復(fù)方甲亢片治療甲亢大鼠合并心臟病變的機理，以期為中西藥結(jié)合治療甲亢性心臟病提供理論依據(jù)。 方法清潔級SD大鼠60只，體重約25

2、0+15g，雌雄各半。隨機分為五組，正常組、模型組、純中藥組、復(fù)方甲亢片組、甲巰咪唑組。每組十二只。正常組每天上午給以2ml蒸餾水喂服，其余四組均造模。造模方法，左旋甲狀腺素鈉片混懸液上午喂服，每日1mg/kg，每天一次。連續(xù)十七天。自造模第十七天始，正常組仍繼續(xù)每天上午給以2ml蒸餾水喂服，其余四組均繼續(xù)造模，繼續(xù)左旋甲狀腺素鈉片混懸液上午喂服，每日1mg/kg，每天一次。此外下午加喂正常組與模型組大鼠每日灌2ml蒸餾水，復(fù)方甲亢片組

3、每日下午加灌復(fù)方甲亢片混懸液2ml(相當(dāng)于生藥8g/kg)，純中藥組每日下午加灌服純中藥液2ml(相當(dāng)于生藥8g/kg)。甲巰咪唑組每日下午加灌服甲巰咪唑液2ml(相當(dāng)于12mg/kg)。共連續(xù)五十天實驗結(jié)束。實驗結(jié)束后，每大鼠以20％烏拉坦麻醉(劑量0.5ml/100g體重)，腹腔注射麻醉。以生理二道儀記錄心電圖，眼眶取血，心臟稱重，檢測血漿BNP、血清TT3、TT4，心肌勻漿測羥普氨酸和Na+-K+-ATP酶。心肌HE染色進(jìn)行病理切

4、片檢測，超薄切片進(jìn)行透射電鏡檢測。免疫組化檢測MMP2、bFGF、TNF-α因子。逆轉(zhuǎn)錄-多聚酶鏈反應(yīng)法(RT-PCR)檢測肌球蛋白重鏈的表型(α-MHC和β-MHC)。 結(jié)果1、復(fù)方甲亢片能比較明顯改善甲亢大鼠合并的心臟疾病癥狀，提高生存率。 2、經(jīng)檢測大鼠血清TT3、TT4水平，檢測大鼠心率及心律，顯示模型組大鼠血清TT3、TT4水平、心率和心律失常發(fā)生率顯著升高。心臟指數(shù)為最大。正常組大鼠血清TT3、TT4水平、心

5、率和心律失常發(fā)生率最低，心臟指數(shù)為最低。經(jīng)藥物治療后所有用藥組血清TT3、TT4水平都有不同程度降低，心率、心律失常發(fā)生率、心臟指數(shù)也有不同程度下降。以復(fù)方甲亢片組血清TT3、TT4水平、心率、心律失常發(fā)生率、心臟指數(shù)降低為最明顯。從統(tǒng)計結(jié)果看，正常組與模型組相比P＜0.01，有極顯著差異。經(jīng)治療后，純中藥組和甲巰咪唑組與模型組相比P＜0.05，均有顯著差異，說明兩種藥物均有效。復(fù)方甲亢片組與模型組相比P＜0.01，有極顯著差異，與甲巰

6、咪唑和純中藥相比P＜0.05，均有顯著差異。說明復(fù)方甲亢片有效，并且效果優(yōu)于純中藥和甲巰咪唑。 3、光鏡下檢測，HE染色顯示正常組心肌細(xì)胞排列整齊，橫紋清楚，間質(zhì)較少，幾乎看不到成纖維細(xì)胞。與正常組相比可見到模型組心肌細(xì)胞肥大，心肌細(xì)胞排列紊亂，肌絲排列異常，心肌纖維走向紊亂，橫斷面肌絲大小不一。間質(zhì)增寬，可看到較多的成纖維細(xì)胞，心肌細(xì)胞間纖維組織增多，還可看到少量心肌細(xì)胞凋亡。部分心肌細(xì)胞肥大、胞質(zhì)空泡變性，肌絲呈顆?；蚪z網(wǎng)狀

7、。模型組為最重，復(fù)方甲亢片組為最輕。心肌的超微結(jié)構(gòu)顯示：正常組在電鏡下可見肌原纖維縱向走向，肌節(jié)結(jié)構(gòu)明顯，Z帶清楚，其間可見線粒體和肌質(zhì)網(wǎng)，線粒體多呈單排分布，嵴結(jié)構(gòu)清楚，肌質(zhì)網(wǎng)相互吻合形成縱管系統(tǒng)。模型組肌質(zhì)纖維溶解，肌質(zhì)網(wǎng)擴張成空泡，大多數(shù)線粒體水腫，嵴斷裂溶解和消失，為重度改變。純中藥組和甲巰咪唑組肌質(zhì)網(wǎng)輕度擴張，線粒體水腫較輕，為輕度損害。復(fù)方甲亢片組肌質(zhì)網(wǎng)輕度擴張，線粒體大致正常。 4、根據(jù)以上三點可以確定采用左旋甲狀

8、腺素鈉灌胃法造模達(dá)到了預(yù)期目的。與所查到的文獻(xiàn)記載相一致。 5、經(jīng)檢測大鼠心肌勻漿Na+-K+-ATP酶水平，顯示模型組大鼠心肌Na+-K+-ATP酶水平顯著降低。正常組大鼠心肌Na+-K+-ATP酶水平最高，經(jīng)藥物治療后所有用藥組心肌Na+-K+-ATP酶水平都有不同程度升高，以復(fù)方甲亢片組心肌Na+-K+-ATP酶水平升高為最明顯。正常組與模型組相比P＜0.01，有極顯著差異。經(jīng)治療后，純中藥組和甲巰咪唑組與模型組相比P＜0

9、.05，均有顯著差異，說明兩種藥物均有效。復(fù)方甲亢片組與模型組相比P＜0.01，有極顯著差異，與甲巰咪唑和純中藥相比P＜0.05，均有顯著差異。說明復(fù)方甲亢片有效，并且效果優(yōu)于純中藥和甲巰咪唑。 6、正常組MMP2、bFGF和TNF-α因子免疫陽性物呈淺黃色，表達(dá)范圍很??；模型組MMP2、bFGF和TNF-α免疫陽性物呈棕黃色，濃度高，表達(dá)范圍廣；所測OD值相比有極顯著差異(P＜0.01)，說明模型組TNF-α、bFGF和MMP

10、2過渡分泌。其余用藥治療組按顏色逐漸變淺，范圍逐漸變小排列順序為純中藥組、甲巰咪唑組、復(fù)方甲亢片組。其中復(fù)方甲亢片組顏色下降最顯著，范圍縮小最多。所測OD值與模型組相比也有極顯著差異(P＜0.01)，其余各治療組治療后顏色有不同程度下降，范圍都有縮小，所測OD值與模型組比(0.01＜P＜0.05)，說明上述藥物都能抑制MMP2、bFGF和TNF-α因子過度分泌，以復(fù)方甲亢片組為效果最好。 7、心肌羥普氨酸含量，正常組最多，而模型

11、組最少，相比有極顯著差異(P＜0.01)，說明心臟相對于正常組來說，模型組有正常膠原的減少。復(fù)方甲亢片組與模型組相比也有極顯著差異，說明復(fù)方甲亢片增加了心肌膠原的含量，另外甲巰咪唑組與模型組相比也有極顯著差異(P＜0.01)。純中藥組與模型組相比有顯著差異(0.01＜P＜0.05)，說明甲巰咪唑和純中藥在防止心臟重構(gòu)方面有效，甲巰咪唑一定程度上優(yōu)于純中藥，但是兩者與復(fù)方甲亢片相比有顯著差異，說明復(fù)方甲亢片的療效優(yōu)于純中藥或者純西藥。

12、 8、心肌肌球蛋白重鏈的表型，通過RT-PCR檢測，經(jīng)計算各組α-MHCmRNA的RT-PCR產(chǎn)物的相對灰度值，心臟α-MHCmRNA的相對灰度值正常組最大，而模型組最小，相比有極顯著差異(P＜0.01)，說明心臟相對于正常組來說，模型組α-MHC明顯減少。復(fù)方甲亢片組與模型組相比也有極顯著差異(P＜0.01)，說明復(fù)方甲亢片提高了α-MHC含量，另外甲巰咪唑組和純中藥組與模型組相比均有顯著差異(0.01＜P＜0.05)，說明甲巰咪

13、唑和純中藥在提高心臟α-MHC含量方面有效，而且與復(fù)方甲亢片相比有顯著差異，說明復(fù)方甲亢片的療效優(yōu)于純中藥或者純西藥。經(jīng)計算各組β-MHCmRNA的RT-PCR產(chǎn)物的相灰度值，心臟β-MHCmRNA的相對灰度值模型組最大，而正常組最小，相比有極顯著差異(P＜0.01)，說明心臟相對于正常組來說，模型組β-MHC明顯升高。復(fù)方甲亢片組與模型組相比也有極顯著差異(P＜0.01)，說明復(fù)方甲亢片是降低了β-MHC含量，另外甲巰咪唑組與模型組相

14、比有顯著差異(0.01＜P＜0.05)，說明甲巰咪唑在降低心臟β-MHC含量方面是有效，而且與復(fù)方甲亢片相比有顯著差異。純中藥組與模型組相比數(shù)值雖有減少，但P＞0.05，無顯著差異。說明復(fù)方甲亢片在降低心肌β-MHC含量的療效方面優(yōu)于純中藥或者純西藥。 結(jié)論高甲狀腺素除影響大鼠心臟血流動力學(xué)改變，還直接損害心肌，造成心臟重構(gòu)，引起心律失常，并可刺激心肌細(xì)胞分泌生物因子引起心衰。甲狀腺素對心臟的作用因劑量而異，高劑量甲狀腺素會刺激