增液布津湯對干燥綜合征模型小鼠干預作用的實驗研究.pdf

1、目的：
　　 利用免疫誘導法建立干燥綜合征(Sjogren'ssyndromeSS)動物模型，動態(tài)觀察增液布津湯對SS模型小鼠一般指標及免疫功能的干預調(diào)節(jié)作用，并從分子細胞生物學角度觀察增液布津湯對SS模型小鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白介素-6（IL-6）及頜下腺水通道蛋白-5(AQP5)的影響，為探討增液布津湯治療SS的作用機制提供基礎(chǔ)依據(jù)，明確其治療靶點，同時為更好地運用于臨床提供可靠的實驗依據(jù)。
　　 方法：

2、
　　 1．理論研究方法：檢索古今中外文獻對干燥綜合征的中醫(yī)臨床辨證分型、治法方藥及實驗研究方面的內(nèi)容進行分析總結(jié)。
　　 2．實驗研究方法：雌性BALB/c小鼠60只，隨機分為正常組對照組、模型組、增液布津湯低劑量組、中劑量組、高劑量組和環(huán)戊硫酮組。除正常對照組外，其余5組均利用免疫誘導法（注射白百破疫苗+完全弗氏佐劑+SD大鼠頜下腺抗原）建立SS小鼠模型，造模后當天正常對照組及模型組用生理鹽水20mL.kg-1ig，

3、中藥低、中、高劑量組用增液布津湯（相當于生藥6.8、13.6、27.3g.kg-1）ig，陽性對照組用環(huán)戊硫酮12.5mg.kg-1ig。首次免疫后第3，7天，用乳化抗原對模型組和用藥組加強免疫2次，劑量為0.2mL，多點背部sc。以后每隔14天用乳化抗原加強免疫1次，至實驗結(jié)束共加強免疫2次，劑量、方法同前兩次，正常對照組不作任何處理。在實驗過程中，動態(tài)觀察增液布津湯對SS模型小鼠攝食量、飲水量、體質(zhì)量及唾液流量的影響。實驗結(jié)束第50

4、天，摘取各組小鼠頜下腺、胸腺、脾臟，計算頜下腺指數(shù)、胸腺指數(shù)、脾指數(shù)，同時鏡下觀察頜下腺病理變化，并用ELISA法，測定小鼠血清TNF-α、IL-6含量，用Western印跡法，測定頜下腺細胞AQP5蛋白的表達。
　　 結(jié)果：
　　 1．理論研究結(jié)果：在文獻資料分析的基礎(chǔ)上，我們認為：中醫(yī)各家雖對該病從不同角度進行了論治，但均是圍繞其本虛標實的病理特點進行辨證論治的。本虛即為諸臟腑氣血陰陽虧虛，其中主要為陰液虧損，津枯液

5、涸，臟腑不榮，津液輸布失常；而標實主要是燥毒、瘀毒互結(jié)。故根據(jù)氣、血、津液理論，擬用養(yǎng)陰益氣、宣肺布津、活血通絡(luò)的增液布津湯治療本病。
　　 2．實驗研究結(jié)果：
　　 2.1一般癥狀表現(xiàn)：與正常對照組相比，模型組小鼠唾液流量減少、飲水量增加、攝食量減少、體重減輕。此外，正常對照組小鼠精神狀態(tài)良好，活動自如，皮毛光滑，無脫毛現(xiàn)象；模型鼠精神萎靡、嗜睡、懶動、活動度下降，皮毛光澤度下降，輕度脫毛，皮毛明顯疏松，部分小鼠尾部破

6、潰結(jié)痂，而增液布津湯能不同程度改善模型小鼠氣陰兩虛的癥狀，小鼠輕度脫毛，皮毛疏松不明顯。
　　 2.2鏡下觀察頜下腺形態(tài)結(jié)構(gòu)變化：模型鼠頜下腺組織出現(xiàn)不同程度的淋巴細胞浸潤、腺泡萎縮或消失、導管擴張等病理變化，且頜下腺萎縮，頜下腺指數(shù)明顯減小，而增液布津湯能明顯減輕淋巴細胞浸潤并抑制頜下腺萎縮。
　　 2.3在免疫功能方面：與正常對照組相比，模型鼠胸腺指數(shù)、脾指數(shù)均增加(P＜0.01，P＜0.05)，表明機體內(nèi)發(fā)生了較強

7、的免疫反應，而給予藥物治療后，均能顯著減小模型鼠的脾指數(shù)，胸腺指數(shù)，故推測增液布津湯可以抑制機體內(nèi)增強的免疫反應。
　　 2.4對細胞因子TNF-α、IL-6的影響：與正常對照組相比，模型組TNF-α及IL-6含量明顯增高(P＜0.01)；與模型組相比，增液布津湯各劑量組TNF-α及IL-6含量均由不同程度降低(P＜0.01)。
　　 2.5Westernblot測定結(jié)果示：與正常對照組相比，模型組AQP5表達水平下降了

8、27.90％(p＜0.01)；與模型組相比，增液布津湯高、中、低劑量組AQP5表達水平分別升高了32.84%(p＜0.01)、12.54%(p＜0.05)、4.51%，環(huán)戊硫酮組AQP5表達水平升高了20.40%(p＜0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 增液布津湯可能通過抑制細胞因子TNF-α、IL-6的分泌，間接地抑制了輔助性T細胞(Th)亞群增殖和分化，從而減輕免疫炎癥反應，緩解SS模型鼠頜下腺淋巴細胞浸潤，腺泡、導管

9、結(jié)構(gòu)及免疫器官的破壞，保護腺體的功能，促進AQP5表達，增加唾液分泌，進一步說明細胞因子及AQP5在SS發(fā)病過程中發(fā)揮著重要作用，同時，也表明養(yǎng)陰益氣、宣肺布津、活血通絡(luò)法的整體調(diào)節(jié)作用可有效緩解SS模型鼠氣陰兩虛的癥狀。
　　 創(chuàng)新點：
　　 從氣陰兩虛的角度，研究養(yǎng)陰益氣、宣肺布津、活血通絡(luò)法對SS小鼠干預作用及其機理，得出該治法通過抑制細胞因子的分泌，減輕免疫炎癥反應，保護腺體功能，促進AQP5表達，增加唾液分泌，