大鼠局灶性腦缺血再灌流后DNA損傷、修復(fù)與神經(jīng)細(xì)胞死亡機(jī)制的研究.pdf

1、華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文大鼠局灶性腦缺血再灌流后DNA損傷、修復(fù)與神經(jīng)細(xì)胞死亡機(jī)制的研究姓名：楊淵申請學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師：方思羽2001.4.1■華中辮擻大掌一濟(jì)匿掣魔2口口J弄搏j撐地托=定律：試圖從DNAmRNA。蛋白質(zhì)三個(gè)不同的切入點(diǎn)入手，探索缺血性腦損傷后神經(jīng)元DNA損傷DNA修復(fù)一凋亡三者之間的關(guān)系，從DNA水平上界定缺血半暗帶及其治療時(shí)間窗，從而加深對(duì)缺血神經(jīng)元損傷機(jī)制的認(rèn)識(shí)、豐富完善神經(jīng)元抗損傷

2、的理論，以尋求新的有效的神經(jīng)元保護(hù)策略。研究方法1采用大鼠大腦中動(dòng)脈阻塞再灌流(MCAO—R)模型，分別觀察缺血30分鐘和2小時(shí)再灌注1、6、12、24、48小時(shí)各時(shí)間點(diǎn)相關(guān)基因的表達(dá)與激活。2HE染色觀察神經(jīng)細(xì)胞壞死及梗塞范圍的動(dòng)態(tài)變化。3原位末端標(biāo)記(TUNEL)技術(shù)觀察缺血再灌注后凋亡細(xì)胞的時(shí)空分布動(dòng)態(tài)變化規(guī)律，以及神經(jīng)細(xì)胞凋亡與壞死的時(shí)空關(guān)系。4免疫組織化學(xué)和原位雜交的方法從蛋白質(zhì)和mRNA水平觀察不同缺血／再灌流時(shí)間下p53表

3、達(dá)空間和數(shù)量的改變，并與TUNEL技術(shù)相結(jié)合，觀察p53表達(dá)與凋亡的時(shí)空關(guān)系。5免疫組織化學(xué)和原位雜交技術(shù)觀察缺血再灌流后DNA修復(fù)蛋白DNAPKcs、PARP基因表達(dá)的時(shí)空分布改變，WesternBlot了解缺血再灌流對(duì)DNAPKcs、PARP蛋白的水解，結(jié)合TUNEL技術(shù)觀察DNA—PKcs、PARP基因表達(dá)、降解與凋亡的時(shí)空關(guān)系。6逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT—PCR)和原位雜交技術(shù)相結(jié)合觀察缺血再灌流后caspase一3mRNA表達(dá)