整體動物水平初步探討DNMT3A在人子宮腺肌病發(fā)病過程中的作用.pdf

1、目的：我們的前期研究發(fā)現(xiàn)來自臨床確診的子宮腺肌病（adenomyosis，AM）患者異位子宮內(nèi)膜組織及從組織中分離、鑒定的間質(zhì)細(xì)胞（ESCs）DNMT3A的mRNA與蛋白表達(dá)均顯著下調(diào)；經(jīng)轉(zhuǎn)染DNMT3A重組慢病毒表達(dá)載體所構(gòu)建的DNMT3A過表達(dá)的ESCs+DNMT3A轉(zhuǎn)基因細(xì)胞的細(xì)胞增殖率及遷移率減慢，細(xì)胞凋亡增加。然而，是否在體內(nèi)也存在相似結(jié)果仍然未知，因此，我們進(jìn)一步從整體動物水平探討DNMT3A在子宮腺肌病發(fā)病過程中的作用。<

2、br>　　方法：收集臨床確診的AM患者異位子宮內(nèi)膜組織10例及正常對照內(nèi)膜組織7例，分別分離培養(yǎng)ESCs，蛋白質(zhì)印記法檢測DNMT3A在上述ESCs中的蛋白表達(dá)水平。設(shè)立正常ESCs（正常組）、異位ESCs（異位組）；并選用DNMT3A典型低表達(dá)的異位 ESCs，轉(zhuǎn)染DNMT3A過表達(dá)慢病毒及對照慢病毒分別構(gòu)建GV205Flag-DNMT3A/異位ESCs（陽性組）和GV205/異位ESCs（陰性組）轉(zhuǎn)基因細(xì)胞；分別注射于用17-β雌激

3、素緩釋片頸部皮下包埋人工控制生理周期的裸鼠背部皮下，每組12只裸鼠，動態(tài)觀察接種細(xì)胞的增殖生長情況。
　　結(jié)果：（1） DNMT3A在異位 ESCs中的蛋白表達(dá)水平顯著低于對照組ESCs；（2）蛋白質(zhì)印記法檢測到DNMT3A在GV205Flag-DNMT3A/異位 ESCs中高表達(dá)，確定轉(zhuǎn)染成功；（3）以免疫組化法檢測四組裸鼠細(xì)胞種植部位組織處人間質(zhì)細(xì)胞特征性波形蛋白表達(dá)，均為陽性；（4）測量統(tǒng)計(jì)細(xì)胞接種部位瘤樣組織，陽性組平均體

4、積為15.375±9.546mm3，小于陰性組平均體積16.75±9.907mm3，比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。正常對照組平均體積為18.417±8.218mm3，顯著小于異位組平均體積32±16.548mm3，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。異位組平均體積大于陰性組和陽性組，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：（1）DNMT3A高表達(dá)能夠抑制ESCs的增殖，減緩瘤樣組織的生長，在整體動物水平上進(jìn)一步表明D