NLRP3炎性體在2型糖尿病并發(fā)冠心病過程中的作用及機(jī)制的初步探討.pdf

1、冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病(coronary atherosclerosis heart disease)是指由于冠狀動(dòng)脈粥樣硬化使管腔狹窄、痙攣或阻塞，導(dǎo)致心肌缺血、缺氧或壞死而引起的心臟病，統(tǒng)稱為冠狀動(dòng)脈性心臟病(coronary heart disease，CHD)或冠狀動(dòng)脈病(coronary arterydisease)，簡稱為冠心病。它是動(dòng)脈粥樣硬化導(dǎo)致器官病變最常見的類型，由于冠狀動(dòng)脈的完全阻塞常為血栓形成所致，近年又被稱為

2、冠狀動(dòng)脈粥樣硬化血栓性心臟病(coronary atherothrombotic heart disease)。
　　目的:
　　本病多發(fā)生于40歲以上的中老年人，男性多于女性，且以腦力勞動(dòng)者居多，是發(fā)達(dá)國家的流行病，已成為歐美國家最多見的心臟病病種。2006年WHO公布的數(shù)據(jù)顯示全球每年冠心病死亡720萬人，隨著世界人口老齡化，全球冠心病的死亡人數(shù)仍將持續(xù)上升，預(yù)計(jì)到2020年全世界每年冠心病的死亡人數(shù)將上升至1100萬人

3、。
　　研究表明，2型糖尿病(type2diabetes mellius，T2DM)已成為冠心病的等危癥，其心血管并發(fā)癥是2型糖尿病患者死亡的主要原因，而在冠心病患者中，2型糖尿病并發(fā)的冠心病占有相當(dāng)大的比例。既往大量研究表明，冠心病與2型糖尿病均是集合代謝紊亂與免疫異常的慢性炎癥性疾病，而近期研究顯示，炎性體在各種慢性炎癥性疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中起著重要作用，其中，核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域樣受體蛋白3(nucleotide bin

4、ding oligomerization domain-like receptor protein3，NLRP3)炎性體可能與2型糖尿病并發(fā)冠心病密切相關(guān)。
　　綜上所述，本項(xiàng)研究通過采集不同病例外周血單個(gè)核細(xì)胞及血漿，比較其外周血單個(gè)核細(xì)胞中NLRP3、ASC、Caspase-1mRNA轉(zhuǎn)錄及蛋白表達(dá)情況，以及血漿中IL-1β、IL-18的含量，以探討NLRP3炎性體在2型糖尿病并發(fā)冠心病過程中的作用及可能的機(jī)制。
　　方

5、法:
　　1.病例采集及分組:選取2016年3月至8月期間入住我院心血管內(nèi)科的患者共110例，分為正常對(duì)照組（30例）、單純冠心病組（30例）、單純2型糖尿病組(20例）及2型糖尿病并發(fā)冠心病組（30例），同時(shí)，采集各組患者一般臨床資料及生化檢驗(yàn)資料。
　　2.分離外周血單個(gè)核細(xì)胞與血漿:抽取各組患者新鮮EDTA抗凝全血各20ml，運(yùn)用Ficoll-Hypaque密度梯度離心法分離各組患者外周血單個(gè)核細(xì)胞，普通高速離心法分離

6、各組患者血漿。
　　3.檢測外周血單個(gè)核細(xì)胞中NLRP3、ASC、Caspase-1mRNA轉(zhuǎn)錄水平:運(yùn)用RT-qPCR法分別檢測各組患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中NLRP3、ASC、Caspase-1mRNA轉(zhuǎn)錄情況。
　　4.檢測外周血單個(gè)核細(xì)胞中NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表達(dá)水平:運(yùn)用Westernblot法分別檢測各組患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表達(dá)情況。
　　5.檢

7、測血漿中IL-1β、IL-18含量:運(yùn)用ELISA法分別檢測各組患者血漿中IL-1β、IL-18含量。
　　6.比較上述各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的差異，并對(duì)其進(jìn)行相關(guān)性分析，以明確NLRP3炎性體在2型糖尿病并發(fā)冠心病過程中的作用并初步探討其機(jī)制。
　　結(jié)果:
　　1.臨床生化資料結(jié)果:各組患者在性別、年齡、BMI、吸煙史上差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，同時(shí)，測得各組患者血清總膽固醇、甘油三酯、超敏C反應(yīng)蛋白、尿酸值差異無統(tǒng)

8、計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　2.RT-qPCR檢測結(jié)果:單純冠心病組、單純2型糖尿病組及2型糖尿病并發(fā)冠心病組患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中NLRP3、ASC、Caspase-1mRNA轉(zhuǎn)錄水平均較正常對(duì)照組顯著增高(P＜0.05)，而單純冠心病組、單純2型糖尿病組及2型糖尿病并發(fā)冠心病組組間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　3.Western blot檢測結(jié)果:單純冠心病組、單純2型糖尿病組及2型糖尿病并發(fā)冠心病組患者

9、外周血單個(gè)核細(xì)胞中NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表達(dá)水平均較正常對(duì)照組顯著增高(P＜0.05)，其中，NLRP3蛋白在2型糖尿病并發(fā)冠心病組患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中的表達(dá)顯著高于單純冠心病組及單純2型糖尿病組(P＜0.05)，而ASC、Caspase-1蛋白在單純冠心病組、單純2型糖尿病組及2型糖尿病并發(fā)冠心病組組間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　4.ELISA檢測結(jié)果:
　　1)測得IL-1β在單純冠心

10、病組、單純2型糖尿病組、2型糖尿病并發(fā)冠心病組患者血漿中的含量分別為（23.35±0.81）ng/L、（22.86±1.67）ng/L、（26.78±1.97）ng/L，均較正常對(duì)照組（12.53±2.79）ng/L顯著升高(P＜0.05)，其中，2型糖尿病并發(fā)冠心病組患者血漿中IL-1β含量顯著高于單純冠心病組及單純2型糖尿病組(P＜0.05)。
　　2)測得IL-18在單純冠心病組、單純2型糖尿病組、2型糖尿病并發(fā)冠心病組患者

11、血漿中的含量分別為（100.00±12.90）ng/L、（116.21±11.77）ng/L、（138.49±16.36）ng/L，均較正常對(duì)照組（50.04±10.20）ng/L顯著升高(P＜0.05)，其中，2型糖尿病并發(fā)冠心病組患者血漿中IL-18含量顯著高于單純冠心病組及單純2型糖尿病組(P＜0.05)。
　　5.相關(guān)性分析結(jié)果:
　　1)各組患者血漿中IL-1β含量與外周血單個(gè)核細(xì)胞中NLRP3mRNA(r=0.2

12、78,p=0.002)、ASC mRNA(r=0.461,p=0.000)、Caspase-1mRNA(r=0.262,p=0.004)及NLRP3蛋白（r=0.591,p=0.000）、ASC蛋白（r=0.354,p=0.001）、Caspase-1蛋白（r=0.450,p=0.000）均呈正相關(guān)。
　　2)各組患者血漿中IL-18含量與外周血單個(gè)核細(xì)胞中ASC mRNA（r=0.386,p=0.000）、Caspase-1mR

13、NA(r=0.295,p=0.001)及NLRP3蛋白（r=0.581,p=0.000）、ASC蛋白(r=0.404,p=0.000)、Caspase-1蛋白（r=0.442,p=0.000）呈正相關(guān)，與NLRP3mRNA相關(guān)系數(shù)為0.168，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　結(jié)論:
　　1.NLRP3炎性體的異常激活可能參與了2型糖尿病并發(fā)冠心病的病理過程，而且，NLRP3炎性體主要是以NLRP3炎性體-促炎細(xì)胞因子(I