低分子肝素防治缺血性急性腎衰竭的實驗研究.pdf

1、目的： 通過建立大鼠腎缺血再灌注損傷（ischemia reperfusion injury，IRI）缺血性急性腎衰竭（ischemia Acute Renal Failure，iARF）模型，觀察iARF不同階段血清促炎細胞因子（TNF-α、IFN-γ）和抗炎細胞因子（IL-4、IL-10）的表達水平變化對中性粒細胞（polymorphonuclear neutrophils，PMNs）細胞間粘附分子-1（intercellular

2、adhesion molecular-1，ICAM-1）的表達及腎組織單核細胞趨化蛋白-1（MCP.1）、核因子-kB（NF-kB）表達的影響，探討低分子量肝素（low moleculaur weight heparin，LMWH）在改善iARF時腎臟免疫反應紊亂、腎臟病理損傷的中的作用。 方法： 45只健康Wistar大鼠（8周齡）隨機分為假手術(shù)對照組（Sham）、模型組（IRI）和治療組。假手術(shù)對照組只行麻醉、開腹、不阻斷腎

3、動脈，模型組與治療組均行右側(cè)腎切除，左側(cè)腎動脈夾閉60min腎缺血后再灌注制備動物模型，治療組于再灌注前30min陰莖背靜脈注射低分子量肝素500U／kg進行干預治療，模型組和正常對照組給予等量生理鹽水注射。各組按不同再灌注時間（1、3、6、24h）再分為4組，并于相應時間點處死大鼠。采血測定血肌酐（Cr）、尿素氮（BUN），應用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）方法檢測各組血清腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、干擾素-γ（IFN-γ）、白介

4、素-4（IL-4）及白介素-10（IL-10）的含量。用流式細胞儀（flow cytometry）測定中性粒細胞（polymorphonuclear neutrophils，PMNs）細胞間粘附分子-1（intercellular adhesionmolecular-1，ICAM-1）的表達。免疫組織化學方法檢測腎臟組織單核細胞趨化蛋白-1（monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1）及核因子-kB

5、（NF-kB）的表達。光學顯微鏡同步觀察腎臟病理改變。 結(jié)果： 1．缺血再灌注24h時模型組和治療組的血Cr、BUN水平明顯升高，與假手術(shù)組相比，有明顯的差異（P<0.01），而治療組和模型組之間則無顯著性差異（P>0.05）。 2．LMWH治療組中性粒細胞ICAM-1的表達較模型組在缺血再灌注6h、24h分別降低了72.2％、48.3％（P<0.01）。 3．模型組單核巨噬細胞和Th1細胞分泌的血清促炎細胞因子

6、（TNF-a、IFN-γ）濃度較假手術(shù)組增加，血清抗炎細胞因子（IL-4、IL-10）濃度顯著降低；經(jīng)LMWH治療后總體趨勢是：血清促炎細胞因子TNF-a、IFN-γ濃度較模型組降低，血清IL-4、IL-10濃度升高。 4．缺血再灌注早期，光鏡可見模型組腎小管上皮細胞腫脹，水樣變性，出現(xiàn)不同程度變性和壞死。缺血再灌注24h時，模型組可見腎髓質(zhì)高度充血，細胞核固縮、溶解、消失，腎外髓質(zhì)大部分腎小管上皮細胞壞死脫落，遠端腎小管及集合

7、管內(nèi)可見細胞管型。LMWH治療后腎臟損傷明顯減輕。 5．免疫組織化學方法顯示，模型組中MCP-1蛋白主要分布在外髓質(zhì)帶的近端腎小管上皮細胞內(nèi)和腎間質(zhì)中，腎小球系膜區(qū)及毛細血管有少量表達，其中以腎小管上皮細胞中表達為主；腎組織NF-κB表達在缺血再灌注3h表達增加，再灌注24h達最高峰，主要在腎小球、腎小管及腎間質(zhì)中，LMWH治療組MCP-1、NF-κB表達均較模型組明顯減少（P<0.01）。 結(jié)論 1．本研究在成功地建

8、立大鼠缺血性急性腎衰竭模型的基礎(chǔ)上，證明缺血再灌注引起的炎癥級聯(lián)反應是導致急性腎損傷的一個重要因素。 2．證明ICAM-1在介導白細胞與血管內(nèi)皮細胞粘附，白細胞激活、浸潤及腎臟缺血再灌注損傷中發(fā)揮了重要作用。LMWH治療組通過減緩ICAM-1表達水平升高的速度，為殘余腎細胞的重新分化和分裂增殖爭得時間。 3．LMWH可減少促炎細胞因子如TNF-a、IFN-γ的分泌，增加抗炎細胞因子如IL-4、IL-10的分泌，改善毛細血