以病毒樣顆粒呈現(xiàn)HPV16 CTLs抗原表位對小鼠TC-1移植腫瘤的免疫干預研究.pdf

1、背景: 現(xiàn)有治療性HPV疫苗在宮頸癌人類臨床試驗中缺乏顯著療效。增強腫瘤抗原特異的殺傷效應細胞免疫應答是提升疫苗效果的重要策略。病毒樣顆粒(VLPs)在激發(fā)體液免疫中己證明具有高度免疫原性，是理想的疫苗載體。
　　目的: 本研究擬探討以VLPs形式呈遞HPV CTLs抗原肽，考察激發(fā)的特異細胞免疫應答以及對腫瘤生長的干預，以揭示VLPs作為治療型疫苗載體的應用潛能，并提供候選治療性HPV疫苗。
　　方法: 根據文獻報道選擇小

2、鼠中證明有效的4個HPV16E6、E7 CTLs表位，經基因重組將其DNA片段克隆于乙肝核心抗原(HBcAg)優(yōu)勢抗原表位。重組蛋白在大腸桿菌中經誘導表達，以硫酸銨鹽析法和蔗糖密度梯度離心純化，并經高效液相凝膠過濾色譜和電鏡進行分析鑒定。制備的VLPs以預防性和治療性策略分別對小鼠TC-1細胞移植腫瘤進行免疫干預。研究檢測了小鼠腫瘤大小變化;脾細胞分離后經特異抗原肽刺激，以ELISA檢測IFN-γ表達，以ELISPOT檢測分泌IFN-γ

3、的淋巴細胞，并以流式細胞分析儀檢測CD8+IFN-γ+細胞;此外，本研究還評價了VLPs疫苗刺激機體產生的免疫記憶，探討了體內預存的抗載體抗體、VLPs結構、免疫途徑等因素對抗原特異治療性VLPs疫苗免疫的影響。
　　結果: 重組蛋白在大腸桿菌中獲得了高效表達，純化的蛋白主要以VLPs形式存在;基于E7(49-57)表位的VLPs以預防性策略免疫小鼠后，完全抑制了移植腫瘤的生長;在治療性策略中，VLPs顯著抑制了2-3mm腫瘤的增

4、長，對于5-6mm甚至更大的腫瘤（8-9mm），VLPs疫苗免疫同樣顯示了明顯的腫瘤生長抑制作用;此外，VLPs疫苗刺激機體產生了有效的免疫記憶應答，最少可持續(xù)15周;機體預存的抗載體抗體對VLPs疫苗發(fā)揮作用無顯著影響;抗原肽體外刺激脾細胞，結果顯示疫苗免疫小鼠脾細胞具有增強的IFN-γ表達，提高的分泌IFN-γ的淋巴細胞水平，以及增加的小鼠體內CD8+IFN-γ+細胞數目。
　　結論: 呈遞HPV E7 CTLs表位的VLPs