布魯氏菌優(yōu)勢抗原表位基因的篩選與抗原免疫特性研究.pdf

1、布魯氏菌?。˙rucellosis）是當(dāng)今世界上廣為流行的人畜共患的慢性傳染性疾病，在我國被列為二類傳染病。該病由革蘭氏陰性細(xì)菌布魯氏菌屬（Brucella）的病原菌感染而引起，人感染后呈現(xiàn)波浪熱以及關(guān)節(jié)痛和睪丸炎等臨床癥狀，動(dòng)物感染后會(huì)造成流產(chǎn)、不孕不育和組織壞死等嚴(yán)重的后果。近十多年來，牲畜感染布魯氏菌病的數(shù)量不斷增加，我國感染布魯氏菌病的人數(shù)持續(xù)上升，布魯氏菌病已經(jīng)成為阻礙牧區(qū)經(jīng)濟(jì)發(fā)展的重要因素，嚴(yán)重威脅了人類健康。目前，在世界范

2、圍內(nèi)，布魯氏菌病還不能被完全治愈，所以，關(guān)于布魯氏菌及布魯氏菌病的研究和防治工作尤為重要，對(duì)布魯氏菌病最主要的防控措施是接種疫苗。
　　布魯氏菌外膜蛋白（Omp）是可以引起保護(hù)性免疫反應(yīng)的一種細(xì)菌表面蛋白，一直被視為關(guān)于布魯氏菌研究的重點(diǎn)；細(xì)胞質(zhì)結(jié)合蛋白被認(rèn)為與布魯氏菌的致病性相關(guān)，可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生強(qiáng)烈的免疫反應(yīng)。本文以布魯氏菌細(xì)胞質(zhì)結(jié)合蛋白基因P39和抗原表位基因（omp10、omp19、omp22、omp25、omp28）為研究

3、對(duì)象，以豬型布魯氏菌疫苗S2弱毒活疫苗菌株的全基因組DNA為模板，設(shè)計(jì)引物克隆目的基因，將得到的目的基因插入質(zhì)粒載體中，成功構(gòu)建重組質(zhì)粒pET-28a-omp10、pET-28a-omp19、pGEX-4T-1-omp22、pET-28a-omp25、pET-28a-omp28和pGEX-4T-1-p39，經(jīng)PCR檢測和測序鑒定正確后，導(dǎo)入到表達(dá)菌株中，IPTG誘導(dǎo)表達(dá)蛋白，重組蛋白經(jīng)聚丙烯酰胺變性凝膠電泳（SDS-PAGE）檢測分析。

4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，重組蛋白可以成功表達(dá)， Omp10、Omp19、Omp22、Omp25、Omp28、P39蛋白的分子量分別為38.5 kD、17.6 kD、47 kD、53.5 kD、52.5 kD、39 kD，與預(yù)期一致。將純化后的蛋白與弗氏佐劑混合后免疫家兔，取血清后進(jìn)行免疫血清的Western blot檢測，結(jié)果顯示，Omp22、P39蛋白刺激機(jī)體產(chǎn)生了相應(yīng)的抗體，具有良好的免疫原性。本試驗(yàn)為進(jìn)一步篩選的確有效的布魯氏菌亞單位疫苗提