EDSV京911株五鄰體優(yōu)勢抗原表位的篩選及鑒定.pdf

1、減蛋綜合征(Egg Drop Syndrome，EDS-76)，又名鴨腺病毒Ⅰ型(DAVⅠ)。該病是由減蛋綜合征病毒(EDSV)引起的一種以產(chǎn)蛋雞產(chǎn)畸形蛋、薄殼或無殼蛋，產(chǎn)蛋率嚴重下降為主要特征的傳染病。1976年首先在荷蘭發(fā)生，以后在西歐國家相繼發(fā)生報道，乃至在世界范圍內(nèi)許多國家都有發(fā)生，給養(yǎng)禽業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟損失。五鄰體蛋白(Penton)是減蛋綜合征病毒主要的結(jié)構(gòu)蛋白之一，五鄰體蛋白具有良好的免疫原性和抗原性，并且含有中和抗原表

2、位，其與細胞表面的整聯(lián)蛋白作用，有助于腺病毒對宿主細胞的吸附結(jié)合、侵入和內(nèi)化。
　　 本研究將攜帶五鄰體基因的重組質(zhì)粒pET-30a-Penton作為PCR擴增模板，利用基因片段重疊表達技術對EDSV五鄰體蛋白的抗原表位進行篩選，為EDSV主要抗原結(jié)構(gòu)的深入研究、亞單位疫苗及診斷試劑的研制提供物質(zhì)基礎。
　　 本研究為了鑒定EDSV五鄰體蛋白的優(yōu)勢抗原表位，制備了鴨抗EDSV陽性血清和鵝抗EDSV血清，可用作血清學診斷試

3、劑，并設計了6個覆蓋五鄰體結(jié)構(gòu)蛋白的多肽片段，短肽長為84-97aa，相互重疊14-24aa，進行融合表達，利用Ni-NTA對蛋白進行純化，經(jīng)Westernblot分析表明PA(1-87aa)能夠被鴨抗EDSV陽性血清所識別。根據(jù)以上試驗結(jié)果，進一步設計了4個覆蓋PA(1-87aa)的多肽片段，這些短肽長為29-33aa，相互重疊12-13aa，進行了第二輪的抗原表位篩選，結(jié)果顯示PA-1(1-33aa)、PA-2(21-49aa)、P

4、A-3(37-68aa)具有抗原性，將3個抗原優(yōu)勢區(qū)合并為一段進行了第三輪篩選，結(jié)果顯示PA-H-1(1-17aa)、PA-H-4(22-39aa)、PA-H-5(30-47aa)、PA-H-6(38-53aa)、PA-H-8(51-68aa)具有抗原性，其中PA-H-1和PA-H-8抗原性最強，取這兩個抗原性最強的短肽進行了第四輪篩選，設計了6個覆蓋PA-H-1和PA-H-8的短肽片段，各合成一對寡聚核酸片段，進行融合表達及純化，經(jīng)W