基于抗原表位組學(xué)的免疫節(jié)育疫苗研究.pdf

1、安全有效的避孕方法是實(shí)施計(jì)劃生育國策、促進(jìn)和諧社會(huì)發(fā)展的保障。目前使用的各種避孕方法仍有諸多不足之處。為獲得安全、有效、可逆的避孕效果，免疫避孕嘗試從生殖抗原中篩選、制備合適的抗原表位發(fā)展為避孕疫苗。理論上抗原表位組學(xué)研究方法可鑒定靶蛋白中所有抗原表位，但傳統(tǒng)的研究技術(shù)并不成熟。隨著“改良生物合成肽法”的出現(xiàn)，使得鑒定靶蛋白單個(gè)抗體識(shí)別的表位最小基序成為可能，為避孕疫苗的研究奠定了基礎(chǔ)。
　　本研究首先基于抗原表位組學(xué)研究方法，根

2、據(jù)前期實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，以與Uu存在交叉反應(yīng)抗原的精子特異蛋白tNASP、Izumo1、SPESP為靶標(biāo)，篩選并驗(yàn)證上述精子特異蛋白中具有抗生育作用的B細(xì)胞表位（BCE），單獨(dú)或?qū)⑵浣M成嵌合肽研究它們的免疫避孕效果。首次發(fā)現(xiàn)精子特異蛋白Izumo1 Ig-like結(jié)構(gòu)域上有一個(gè)影響精-卵融合的BCE-P6（YSFYRV，可特異結(jié)合卵膜），單獨(dú)P6或P6與tNASP、SPESP中BCE組成的嵌合肽免疫動(dòng)物，發(fā)現(xiàn)P6免疫避孕效果與嵌合肽基本一致；本

3、研究還首次發(fā)現(xiàn)P6在各物種中高度保守并僅在人、小鼠等物種的精子中特異表達(dá)，實(shí)驗(yàn)證實(shí)免疫P6后雌鼠未出現(xiàn)主要臟器的免疫病理損傷，基本符合世界衛(wèi)生組織對(duì)免疫節(jié)育疫苗高安全性的要求；進(jìn)一步觀察發(fā)現(xiàn)，在使用P6免疫動(dòng)物6個(gè)月之后，動(dòng)物生育率得到了部分恢復(fù)；深入研究發(fā)現(xiàn)P6免疫避孕的機(jī)制主要是免疫P6后產(chǎn)生的抗血清影響了小鼠精-卵融合，最終導(dǎo)致不孕。其次，根據(jù)前期實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，我們選擇Uu編碼蛋白中與精子蛋白存在交叉反應(yīng)抗原的UreG作為靶標(biāo)，篩選并

4、驗(yàn)證UreG中的BCE，研究其免疫避孕效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)UreG蛋白中有5個(gè)表位，分別為KRPLIIG，RILLNT，DLAPY，LKSR和RLQLAL，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)KRPLIIG和LKSR表位具有一定的抗生育作用。但生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，表位KRPLIIG和LKSR與動(dòng)物多處組織存在交叉反應(yīng)性抗原表位，其安全性有待進(jìn)一步研究。
　　總之，本研究首次基于抗原表位組學(xué)的研究方法，將具有交叉反應(yīng)抗原的精子蛋白與微生物蛋白作為靶標(biāo)分別研究，發(fā)