CD200+大腸癌干細胞的分離、鑒定及其基因表達譜特點的研究.pdf

1、南方醫(yī)科大學2011級碩士學位論文CD200大腸癌干細胞的分離、鑒定及其基因表達譜特點的研究IsolationandIdentificationofCD200ColorectalCancerCellsandtheInvestigationofitsGeneExpressionProfile課題來源：廣東省科技計劃項目學位申請人導師姓名專業(yè)名稱培養(yǎng)類型培養(yǎng)層次所在學院張珊珊肖冰教授內(nèi)科學(消化系病學)學術型碩士研究生第一臨床醫(yī)學院答辯委員

2、會主席曾志榮教授答辯委員會委員毛華教授鐘碧慧教授李初俊教授王新穎教授2014年04月30El廣州摘要疾病和抑制排斥反應中作為一種免疫耐受信號。腫瘤的發(fā)展和復發(fā)的特點是發(fā)生免疫逃逸，而產(chǎn)生腫瘤免疫耐受是腫瘤通過逃避免疫系統(tǒng)的識別，使腫瘤能夠繼續(xù)生長，因此大腸癌干細胞可能通過CD200依賴的免疫機制逃避免疫監(jiān)視，CD200的表達很可能是大腸癌腫瘤干細胞與腫瘤免疫之間的重要橋梁。同時，CD200也被發(fā)現(xiàn)表達于大腸癌、骨髓瘤、乳腺癌、腦癌、黑色

3、素瘤和正常的間充質(zhì)干細胞中，并且CD200的表達與這些腫瘤的發(fā)展進程有重要關聯(lián)。綜上，CD200被認為極有可能是一種新型的大腸癌干細胞標志，但這一說法仍缺乏充足的證據(jù)支持。我們前期動物實驗發(fā)現(xiàn)高表達CD200的大腸癌細胞致瘤能力明顯較CD200大腸癌細胞強。同等數(shù)量的兩群細胞，CD200成瘤速度明顯快于CD200，且最終形成的瘤體更大。因此，根據(jù)本課題組前期科研成果，本研究首先分析CD200在多種大腸癌細胞系中表達情況，然后分選出陽性表

4、達和陰性細胞進行體外成球及侵襲實驗，進一步驗證CD200為大腸癌干細胞表面標志。同時分析CD200特異性大腸癌基因表達譜，探究與大腸癌獨特生物學特性相關的基因表達及信號通路作用情況，對研究大腸癌干細胞的作用機制及尋找根除大腸癌干細胞的潛在靶點至關重要。材料與方法：1大腸癌細胞培養(yǎng)6種大腸癌細胞株(col0205lovo；sw620；sw480；swlll6；HT29)在含10％胎牛血清的RPMll640培養(yǎng)基中培養(yǎng)。2流式檢測CD200

5、細胞所占比例檢測6種大腸癌細胞株CD200細胞所占比例，收集約106個細胞，標記APCCD200單克隆抗體，空白對照組標記APC一同源IgG單克隆抗體，4“C避光孵育20分鐘，分析緩沖液洗滌2次，3009離心10分鐘，重懸于分析緩沖液中準備上機檢測。3無血清培養(yǎng)col0205細胞將col0205細胞在含DMEM／F12(I：I)，2％B27，20rig／m1EGF，lOng／mlbFGF和10ng／mlLIF的無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)兩周。4