模擬微重力效應(yīng)對(duì)BUB1-MAD2沉默后人骨肉瘤細(xì)胞CIN的影響.pdf

1、染色體不穩(wěn)定性(Chromosomal Instability,CIN)具體表現(xiàn)為染色體數(shù)目的改變和染色體結(jié)構(gòu)的改變。課題組前期的研究中發(fā)現(xiàn),隨著人骨肉瘤細(xì)胞(U-2OS)在模擬微重力環(huán)境中生長(zhǎng)時(shí)間逐漸延長(zhǎng),U-2OS細(xì)胞多極紡錘體發(fā)生率逐漸升高且細(xì)胞周期被阻滯在G2/M期,BUB1蛋白與MAD2蛋白的表達(dá)量也隨之升高。為了進(jìn)一步研究模擬微重力效應(yīng)對(duì)U-2OS細(xì)胞染色體不穩(wěn)定性影響的分子機(jī)制,本課題首先利用RNA干擾技術(shù)以pSilenc

2、er4.1-CMVneo為載體構(gòu)建出2個(gè)pSilencer4.1-CMVneoBUB1siRNA重組體。隨后,將此重組體和課題組前期構(gòu)建的pSilencer4.1-CMVneoMAD2siRNA重組體以及作為對(duì)照的亂序重組體分別轉(zhuǎn)染入U(xiǎn)-2OS細(xì)胞中篩選出對(duì)照組U-2OS細(xì)胞單克隆3個(gè),U-2OSBUB1RNAi細(xì)胞單克隆4個(gè),U-2OSMAD2RNAi細(xì)胞單克隆7個(gè)用于后續(xù)驗(yàn)當(dāng)中。最后,將細(xì)胞置于模擬微重力系統(tǒng)中分別培養(yǎng)24小時(shí)、48

3、小時(shí)和72小時(shí)后,對(duì)其多極紡錘體發(fā)生率、細(xì)胞周期以及DNA含量進(jìn)行分析。
　　研究結(jié)果表明,隨著對(duì)照組U-2OS細(xì)胞在模擬微重力系統(tǒng)中培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),其多極紡錘體發(fā)生率逐漸升高,而在相同環(huán)境中生長(zhǎng)的BUB1/MAD2沉默后的U-2OS細(xì)胞,其多極紡錘體發(fā)生率逐漸下降。并且模擬微重力效應(yīng)仍可將BUB1或MAD2蛋白被沉默后的U-2OS細(xì)胞阻滯在G2/M期,但是阻滯效果隨模擬微重力時(shí)間的延長(zhǎng)而降低。另外隨著模擬微重力效應(yīng)對(duì)BUB1或M