氨氯地平對oxLDL誘導(dǎo)HUVEC-12細(xì)胞株CD40表達(dá)的影響及其機(jī)制.pdf

1、研究背景:CD40信號途徑在介導(dǎo)炎癥細(xì)胞活化和體液免疫過程中起著重要作用,研究發(fā)現(xiàn)活化的內(nèi)皮細(xì)胞存在CD40高表達(dá)并介導(dǎo)多種炎癥因子表達(dá),參與動脈粥樣硬化(As)斑塊形成、發(fā)展及破裂的諸多環(huán)節(jié)。課題組的早期研究發(fā)現(xiàn)鈣通道阻滯劑(CCB)類藥物具有顯著的抗As作用,這種作用并不完全依賴于降壓效應(yīng),但具體機(jī)制仍不清楚。本研究擬觀察第三代鈣通道阻滯劑氨氯地平對血管內(nèi)皮細(xì)胞CD40表達(dá)的影響,初步探討氨氯地平抗As的可能機(jī)制。
　　目的:

2、從炎癥反應(yīng)角度,觀察氨氯地平對oxLDL誘發(fā)的HUVEC-12內(nèi)皮細(xì)胞CD40表達(dá)的影響,并對其機(jī)制進(jìn)行探討,為氨氯地平抗As提供實驗依據(jù)。
　　方法:
　　1、培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株(HUVEC-12細(xì)胞),利用 RT-PCR技術(shù)檢測CD40mRNA表達(dá),Western-blot技術(shù)檢測CD40蛋白水平,篩選oxLDL誘導(dǎo)HUVEC-12細(xì)胞CD40高表達(dá)的最佳劑量和時間;
　　2、以LOX-1抑制劑多聚肌苷酸(PI

3、A)預(yù)處理HUVEC-12細(xì)胞,檢測CD40mRNA和蛋白表達(dá);
　　3、不同濃度氨氯地平預(yù)處理HUVEC-12細(xì)胞,與 oxLDL共同孵育24h后,利用RT-PCR技術(shù)檢測HUVEC-12細(xì)胞 CD40mRNA的表達(dá),細(xì)胞免疫化學(xué)染色和Western-blot技術(shù)檢測CD40蛋白的表達(dá);觀察不同濃度氨氯地平對LOX-1基因表達(dá)的影響,探討氨氯地平下調(diào)CD40表達(dá)的機(jī)制。
　　結(jié)果:
　　1、CD40在靜息狀態(tài)的HUV

4、EC-12細(xì)胞上少量表達(dá),oxLDL對HUVEC-12細(xì)胞CD40的表達(dá)有明顯促進(jìn)作用,oxLDL在0-50μg/ml的濃度范圍內(nèi),隨oxLDL濃度增加,CD40的表達(dá)亦隨之上調(diào),當(dāng)oxLDL濃度為50μg/ml時,CD40表達(dá)達(dá)峰值,當(dāng)濃度為100μg/ml時,內(nèi)皮細(xì)胞上CD40表達(dá)下降。用50μg/ml的oxLDL與內(nèi)皮細(xì)胞孵育0-24h,隨著處理時間的延長,CD40表達(dá)逐漸增加,在24h時,CD40的表達(dá)為最大值。
　　2、

5、LOX-1抑制劑PIA250μg/ml預(yù)處理細(xì)胞1h后,明顯降低50μg/ml oxLDL孵育24h誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞CD40表達(dá)。
　　3、氨氯地平對oxLDL誘導(dǎo)的HUVEC-12細(xì)胞CD40高表達(dá)有明顯的下調(diào)作用,氨氯地平在0.1-10μmol/L的濃度范圍內(nèi),隨氨氯地平濃度增加,CD40的表達(dá)逐漸下調(diào),當(dāng)氨氯地平濃度為1.0μmol/L時,CD40表達(dá)明顯下調(diào);10μmol/L時,CD40表達(dá)下調(diào)至最低水平。氨氯地平對oxLD

6、L誘導(dǎo)的HUVEC-12細(xì)胞LOX-1基因表達(dá)亦有下調(diào)作用,隨氨氯地平濃度增加,LOX-1mRNA的表達(dá)逐漸下調(diào)。
　　結(jié)論:
　　1、oxLDL可以誘導(dǎo)HUVEC-12細(xì)胞CD40表達(dá)上調(diào);
　　2、阻斷LOX-1受體可以下調(diào)oxLDL誘導(dǎo)的HUVEC-12細(xì)胞CD40高表達(dá);
　　3、氨氯地平對oxLDL誘導(dǎo)的HUVEC-12細(xì)胞CD40高表達(dá)有下調(diào)作用,并隨濃度增大而作用加強(qiáng)。氨氯地平的這種作用可能與下調(diào)L