激發(fā)型共刺激分子CD40信號通路對人臍靜脈內皮細胞的影響及其機制.pdf

1、內皮細胞向平滑肌樣細胞的轉分化近年來受到越來越多的重視。這種轉分化可能在肺纖維化、動脈粥樣硬化及腎臟纖維化等疾病中起重要作用。內皮細胞上有CD40分子的高表達，激發(fā)型CD40信號可以導致內皮細胞功能失調。CD40信號通路對內皮細胞轉分化的影響未見相關報道。轉化生長因子β(-TGF-β)是目前認為作用最強的促纖維化生長因子，其在腎小管上皮細胞轉分化中被認為是最重要的，但在內皮細胞轉分化中的作用還不清楚。 目的：應用抗CD40激發(fā)型

2、單克隆抗體5C11作用于體外培養(yǎng)的臍靜脈內皮細胞，通過流式細胞儀、免疫細胞化學等方法觀察內皮細胞能否向平滑肌樣細胞轉化，同時探討轉化生長因子-β(TGF-β)在轉化中的作用。 方法： 1)MTT比色法：把處于對數生長期生長狀態(tài)良好(細胞呈鋪路石樣)的HUVEC接種到96孔板，加入不同濃度的5C11，同時設陰性對照組。檢測5C11對HUVEC促增殖或抑制的影響。2)細胞爬片免疫化學法：把生長良好的細胞接種于6孔培養(yǎng)板，每孔放一滅菌

3、蓋玻片，培養(yǎng)后，分組加入5C11，濃度為5 ug/ml，同時設陰性對照組，繼續(xù)培養(yǎng)。分別于24h、48h、72h取出玻片，觀察內皮細胞的轉化情況。3)流式細胞儀檢測經5C11刺激后的內皮細胞中TGF-β的Ⅱ型受體的表達情況。4)流式細胞儀檢測經5C11刺激后的內皮細胞是否發(fā)生凋亡。 結果：1)MTT法檢測結果：應用MTT法檢測5C11對HUVEC抑制或增殖的影響，實驗數據應用統(tǒng)計分析軟件分析無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。流式細胞

4、儀檢測細胞凋亡：內皮細胞經過5C11刺激72H后應用流式細胞儀未檢測到細胞凋亡的發(fā)生。2)抗CD40單克隆抗體5C11不同濃度刺激對HUVEC的影響：細胞免疫組織化學顯示，經過5C11刺激后HUVEC正常血管內皮細胞的標志分子Flk1隨著刺激時間的延長表達下調，肌成纖維細胞的標志分子a-SMA隨著刺激時間的延長表達上調(P<0.05)。3)流式細胞儀檢測經5C11刺激后HUVEC上轉化生長因子-β(TGF-p)II型受體的表達是隨著刺激