綠原酸對高糖誘導人臍靜脈內(nèi)皮細胞凋亡的保護作用及其對NF-κB信號通路的影響.pdf

1、目的：現(xiàn)如今人們生活條件逐漸提升，生活方式也開始有了新的變化，糖尿病患病率逐年遞增，糖尿病急性并發(fā)癥發(fā)生率及病死率日益減少，糖尿病慢性并發(fā)癥如大血管病逐漸成為導致糖尿病患者死亡的主要原因。綠原酸(Chlorogenic acid CGA)是人類日常飲食中一種常見的多元酚類物質(zhì)，一些研究證實CGA通過抗氧化清除反應性氧化物ROS、抗炎作用等對血管損傷起到一定保護作用。NF-κB是細胞核中起到很重要作用的轉錄因子，參與多種基因的表達和調(diào)控。

2、本研究將觀察CGA對高糖誘導的臍靜脈內(nèi)皮細胞細胞凋亡發(fā)揮何種調(diào)節(jié)作用，并探討CGA的這一作用是否與NF-κB信號通路有關。
　　方法：⑴取5～9代對數(shù)生長期人臍靜脈細胞融合細胞(EA.hy926)，用無血清培養(yǎng)基饑餓24h，更換實驗用液隨機分配為實驗組及對照組進行實驗。⑵應用MTT法檢測各組細胞活性;Hoechst33258熒光染色法檢測細胞凋亡;運用流式細胞術（AnnexinⅤ-FITC/PI試劑盒、活性氧檢測試劑盒）檢測細胞凋

3、亡及ROS活性氧產(chǎn)生;western-blot技術檢測各組細胞phospho-NF-κB p65、IκBα蛋白表達及活性。
　　結果：①根據(jù)MTT實驗結果，我們選用15、25umol/L濃度的CGA進行下一步實驗。②熒光顯微鏡下觀察到經(jīng)過Hoechst33258染色后，正常對照組染色質(zhì)結構正常，呈均勻熒光;高滲組與對照組無明顯差異;高糖組細胞凋亡明顯增多;高糖+綠原酸組細胞凋亡較高糖組有所減少，但凋亡細胞仍多于正糖對照組。③流式細

4、胞儀分析凋亡，與對照組相比，高糖增加內(nèi)皮細胞凋亡率;高滲組與對照組無明顯差異;而高糖+CGA組與高糖組比較細胞凋亡率明顯下降。④流式細胞儀分析活性氧產(chǎn)生，結果顯示，與對照組相比，高糖組培養(yǎng)48h細胞內(nèi)ROS產(chǎn)生明顯升高，而CGA預處理18h后可以逆轉高糖所致細胞內(nèi)ROS的升高;高滲組與對照組無明顯差異。⑤高糖培養(yǎng)48h后與對照組比較NF-κB p65蛋白表達增加，IκB-α蛋白表達減少;而高糖+綠原酸組與高糖組比較NF-κB p65蛋白