鐵對(duì)銅誘導(dǎo)矛尾復(fù)蝦虎魚脂肪沉積及其離子轉(zhuǎn)運(yùn)的影響.pdf

1、銅（Cu）和鐵（Fe）都是動(dòng)物體生理代謝必需的微量元素，它們?cè)谖蘸痛x上有著復(fù)雜的交互作用。銅和鐵的相互關(guān)系在哺乳動(dòng)物研究廣泛。研究發(fā)現(xiàn)，水體鐵含量過高會(huì)降低銅的吸收，因而對(duì)機(jī)體生理生化代謝有顯著影響。然而，在魚類，有關(guān)銅和鐵在生理代謝上的交互作用鮮見報(bào)道。本論文主要探討鐵對(duì)銅誘導(dǎo)矛尾復(fù)蝦虎魚肝臟脂肪沉積的影響及其在離子轉(zhuǎn)運(yùn)中的相互作用。主要研究結(jié)果如下：
　　1.探討了鐵對(duì)銅誘導(dǎo)的矛尾復(fù)蝦虎魚脂肪沉積的影響。采用3×2雙因素實(shí)

2、驗(yàn)設(shè)計(jì)，矛尾復(fù)蝦虎魚在0（對(duì)照組）、0.606μM Cu、1.212μMCu、1.128μM Fe、0.606μM Cu+1.128μM Fe和1.212μM Cu+1.128μM Fe六個(gè)處理中暴露56d，分別于28 d和56 d取樣。測(cè)定六個(gè)處理中蝦虎魚的生長(zhǎng)性能、肝臟脂肪與金屬含量、肝臟組織學(xué)、組織化學(xué)、肝臟脂代謝相關(guān)酶活及基因表達(dá)。水體鐵添加提高了第56 d最高銅濃度組蝦虎魚的存活率。第28 d和第56 d，鐵添加提高了肝臟鐵含

3、量而降低了肝臟銅含量。而且，鐵添加降低了脂肪合成相關(guān)酶的酶活及其基因表達(dá)水平（葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（G6PD）和脂肪酸合成酶（FAS）），升高了脂肪甘油三酯水解酶（ATGL）基因的表達(dá)。在相同的銅濃度下，第28 d鐵添加下調(diào)了固醇調(diào)控元件結(jié)合蛋白-1（SREBP-1）和過氧化物酶體增殖物激活受體（PPARγ）基因的表達(dá)，而上調(diào)了PPARα基因的表達(dá)。然而第56 d，SREBP-1、PPARγ和PPARα基因表達(dá)水平趨勢(shì)多變，且與水體鐵

4、濃度關(guān)系不明顯。轉(zhuǎn)錄因子與酶活及其基因表達(dá)水平的相關(guān)性表明，鐵添加通過調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子來(lái)調(diào)控這些酶活及其基因的表達(dá)。總之，鐵添加通過下調(diào)脂肪合成代謝和上調(diào)脂肪分解代謝來(lái)降低銅誘導(dǎo)魚類脂肪沉積。在鐵暴露下，蝦虎魚肝臟中這些酶活及其基因表達(dá)的不同反應(yīng)模式，表明鐵影響銅誘導(dǎo)脂代謝的改變具有時(shí)間效應(yīng)。
　　2.克隆得到了蝦虎魚銅離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（CTR1和CTR2）、二價(jià)金屬離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（DMT1）和金屬硫蛋白（MT1和MT2）的cDNA全長(zhǎng)序列

5、，探討了銅和鐵共暴露對(duì)這些離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因表達(dá)水平的影響。蝦虎魚 CTRs蛋白序列具有兩個(gè)富含蛋氨酸結(jié)構(gòu)域（MxM和 MxxxM）和三個(gè)跨膜域。在羧基末端，CTR1含有一個(gè)保守的半胱氨酸和組氨酸殘基結(jié)構(gòu)域（HCH），而CTR2不具有此結(jié)構(gòu)域。蝦虎魚DMT1蛋白序列具有12個(gè)保守的疏水性跨膜域。而蝦虎魚MTs蛋白序列在半胱氨酸殘基數(shù)量（20;31.75％）及其位置上高度保守。這五個(gè)基因在所有組織都能表達(dá)，但是在肝臟中表達(dá)水平最高。銅暴露有