維甲酸誘導人大腸癌細胞腫瘤免疫原性的改變.pdf

1、中國醫(yī)科大學碩士學位論文維甲酸誘導人大腸癌細胞腫瘤免疫原性的改變姓名：汪璇申請學位級別：碩士專業(yè)：細胞生物學指導教師：王蕓慶20000401主要組織相容性抗原I 類分子( M H C - C l a s s - - I ) 的表達情況。由于維甲酸對不同的細胞系作用特點可以不同，目前對于維甲酸誘導人大腸癌細胞系C l o n e A 細胞的免疫原性改變情況尚未見報導。鑒于維甲酸處理的腫瘤細胞作為腫瘤疫苗時兼有免疫原性強，細胞惡性表型降低，

2、細胞分化( ( ：e l lD i f f e r e n t i a t i o n ) 等多種特征，因此，進一步研究維甲酸處理的細胞作為腫瘤疫苗應用的可能性將有一定意義。。在此基礎上，本實驗選擇了低分化、高侵襲的人大腸癌細胞系C l o n e A 作為靶細胞進行研究。因考慮到人大腸癌腫瘤相關抗原L E A ( L a r g eE x t e r n a lA n t i g e n ) 在高、中分化人大腸癌細胞系C C L l

3、8 7 、C C L 2 2 9 中有較高表達，而在低分化細胞系C l o n e A 中則低表達，并且C l o n e A 細胞具有較強的侵襲力，因此設想應用維甲酸誘導分化后可能會產(chǎn)生較為顯著的實驗結(jié)果，并且對揭示L E A是否為人大腸癌細胞表面的分化標志抗原提供一定線索。實驗中應用1 0 “M 濃度A T R A 誘導人大腸癌細胞系C l o n e A 細胞不同時間，即3 天( R 3 ) 、5 天( R 5 ) 和7 天( R

4、 7 ) 后，分別應用小鼠抗人單克隆抗體A n t i —H L A ～A B C 、A n t i —H L A —D R 、A n t i —C D 5 4 、A n t i —C D H a 、N D 一1 作為第一抗體，F(xiàn) I T C 標記的羊抗小鼠I g G 作為第二抗體，進行間接免疫熒光染色，立即上流式細胞儀( F A C S ) 檢測C l o n e A 細胞表面與免疫原性相關的抗原分子表達情況。這些免疫分子包括M H

5、C 分子即人類白細胞抗原1 、I I 類分子( H L A —C l a s s —I 、I I ) 、細胞闖粘附分子一1 ( I —C A M 一1 ／C D 5 4 ) 、淋巴細胞功能相關抗原一1 ( L F A 一1 ／C D l l a )和L E A 。經(jīng)平均相對熒光強度測定，結(jié)果顯示維甲酸處理3 天即可見瘤細胞表面H L A —I 類分子表達，且逐漸增高，可～直持續(xù)到第7 天；I C A M 一1 和L E A 在第5 天開