華蟾素誘導(dǎo)人宮頸癌Caski細(xì)胞免疫原性死亡的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、　　目的：探討抗癌中藥華蟾素對宮頸癌Caski細(xì)胞免疫原性死亡的影響,為建立抗癌中藥誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞免疫治療新方法提供理論支持和實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
　　方法：(1) MTT法分析細(xì)胞增殖；(2)流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期和鑒定凋亡細(xì)胞；(3)瓊脂糖凝膠電泳分析DNA片段化；(4)Western Blot分析不同濃度藥物處理后細(xì)胞胞漿中細(xì)胞色素C的含量；(5)熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞中活性氧的含量變化；(6)多功能熒光酶標(biāo)儀檢測線粒體膜電位；(7

2、)細(xì)胞劃線實(shí)驗(yàn)分析細(xì)胞的遷移能力；(8)免疫熒光和流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞膜上鈣網(wǎng)蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：(1)華蟾素能夠顯著性抑制Caski細(xì)胞的增殖和遷移能力,抑制效應(yīng)呈時間和劑量依賴性,其48h小時的半數(shù)抑制濃度值(IC50)為1.68mg/ml；(2)華蟾素干擾細(xì)胞周期,G2/M期細(xì)胞比例顯著性升高,G1期細(xì)胞比例顯著性下降,同時凋亡細(xì)胞數(shù)量大幅增加；(3)華蟾素處理后,細(xì)胞染色體DNA出現(xiàn)凋亡細(xì)胞典型的DNA片段化現(xiàn)象,同

3、時伴有細(xì)胞線粒體膜電位降低、細(xì)胞色素C由線粒體向細(xì)胞質(zhì)釋放；(4)與對照組相比,經(jīng)華蟾素處理組細(xì)胞內(nèi)活性氧含量明顯增加；(5)細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)表明華蟾素能夠抑制細(xì)胞的遷移；(6)華蟾素能夠誘導(dǎo)鈣網(wǎng)蛋白(CRT)發(fā)生膜轉(zhuǎn)位。
　　結(jié)論： 華蟾素具有抑制人宮頸癌Caski細(xì)胞增殖的藥理活性,其機(jī)制與抑制細(xì)胞周期和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡有關(guān), 并且華蟾素能夠誘導(dǎo)鈣網(wǎng)蛋白從腫瘤細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)位到細(xì)胞膜上并發(fā)生簇集。提示,華蟾素能誘導(dǎo)Caski 細(xì)胞發(fā)生免