珠子參皂苷聯(lián)合5-FU對人宮頸癌caski細(xì)胞的作用研究.pdf

1、　　目的：探討珠子參皂苷(PJ)單獨(dú)及其與5-氟尿嘧啶(5-FU)聯(lián)合應(yīng)用對人宮頸癌caski細(xì)胞誘導(dǎo)其凋亡的作用,為臨床上聯(lián)合應(yīng)用珠子參皂苷和5-FU治療宮頸癌提供實驗依據(jù)。
　　方法：(1) 取珠子參生藥材,以醇提法制備珠子參皂苷粉末。(2) 體外培養(yǎng)人頸鱗癌Caski細(xì)胞系細(xì)胞,用四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測不同濃度的5-FU、珠子參以及合用在作用24、48及72h對caski細(xì)胞增殖的影響以及倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)

2、的變化。(3) 選擇適宜濃度的PJ 、5-FU及PJ與5-FU的合用組作用于Caski細(xì)胞,電鏡下觀察caski細(xì)胞形態(tài)的變化。(4) qPCR檢測不同藥物處理后抑癌基因p53,p21與癌基因c-myc,c-fos的表達(dá)情況。(5) Western blot檢測PJ 、5-FU及PJ與5-FU的合用處理后p53,p21蛋白及c-myc,c-fos蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：(1) MTT比色法顯示：PJ能抑制caski細(xì)胞的增殖

3、,PJ和5-FU合用能增強(qiáng)單藥對caski細(xì)胞的增殖抑制作用。(2) 通過透射電子顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)：PJ 可明顯抑制宮頸癌 caski 細(xì)胞的生長,細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞膜微絨毛減少或消失,細(xì)胞活躍度明顯下降,細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)凋亡小體,PJ與5-FU合用組抑制caski細(xì)胞生長作用最明顯,凋亡細(xì)胞增多,出現(xiàn)凋亡晚期的蟹爪狀細(xì)胞,整體凋亡細(xì)胞比例增加。(3) qPCR法結(jié)果顯示：PJ可上調(diào)抑癌基因p53,p21的表達(dá),下調(diào)癌基因c-myc,c-fos的表達(dá)

4、；與5-FU組相比,PJ和5-FU合用組在上調(diào)抑癌基因p53,p21的表達(dá),下調(diào)癌基因c-myc,c-fos表達(dá)的作用更加明顯。(4)Western blot結(jié)果表明：PJ可上調(diào)p53蛋白的表達(dá),顯著上調(diào)p21蛋白的表達(dá),顯著下調(diào)c-myc,c-fos蛋白的表達(dá)；與5-FU組相比,PJ和5-FU合用組在上調(diào)p53,p21蛋白,下調(diào)c-myc,c-fos蛋白表達(dá)上的作用更加明顯。
　　結(jié)論：本實驗所選用劑量的PJ對人宮頸癌cask

5、i細(xì)胞有明顯抑制增殖的作用,進(jìn)一步證明了PJ在體外可抑制腫瘤細(xì)胞生長。PJ與5-FU合用能增強(qiáng)5-FU對caski細(xì)胞的增殖抑制作用,PJ與5-FU合用可誘導(dǎo)人宮頸癌caski細(xì)胞的凋亡,表明PJ可增強(qiáng)5-FU對人宮頸癌的抑制作用及誘導(dǎo)凋亡的作用。PJ與5-FU合用可能通過影響caski細(xì)胞DNA合成,改變細(xì)胞周期時相分布、誘導(dǎo)凋亡發(fā)揮抑制細(xì)胞增殖作用,其分子機(jī)制可能與上調(diào)p53,p21的表達(dá),下調(diào)c-myc,c-fos的表達(dá)有關(guān)。本研