納米羥基磷灰石懸浮液對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞增殖及細(xì)胞周期影響的研究.pdf

1、目的：
　　 1、初步探討納米羥基磷灰石懸浮液對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞的作用,為納米羥基磷灰石應(yīng)用于牙周病的治療提供依據(jù)。
　　 2、為本課題組今后研究納米及介孔材料載藥后對(duì)相關(guān)成纖維細(xì)胞的凋亡影響做準(zhǔn)備。
　　 方法：
　　 1.利用組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)、鑒定并傳代人牙周膜成纖維細(xì)胞,利用第4～6代成纖維細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
　　 2.實(shí)驗(yàn)室制備納米羥基磷灰石,利用羧甲基纖維素鈉、六偏磷酸鈉作為分散劑,進(jìn)行對(duì)

2、比,觀察兩種分散劑對(duì)納米羥基磷灰石的分散效果,并進(jìn)行簡(jiǎn)單的細(xì)胞培養(yǎng),對(duì)比細(xì)胞生長(zhǎng)情況,選擇合適的分散劑。
　　 3.采用分散劑對(duì)納米羥基磷灰石進(jìn)行分散,制備1％濃度的納米羥基磷灰石懸浮液,分別稀釋至0.5％、0.25％、0.1％、0.05％、0.025％,并設(shè)置單獨(dú)0.1％濃度的納米羥基磷灰石組、單獨(dú)0.1％濃度的羧甲基纖維素鈉組、0.005％介孔硅組、0.01％氫氧化鈣組及空白對(duì)照組,對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞各培養(yǎng)24h、48h、

3、72h后,用MTT法對(duì)各組細(xì)胞增殖情況進(jìn)行測(cè)定,評(píng)價(jià)各組對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞增殖的影響。
　　 4.選取0.5％濃度的懸浮液與各對(duì)照組繼續(xù)細(xì)胞培養(yǎng)48h,將各組培養(yǎng)后的細(xì)胞,采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期分布情況,分析各組對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞的細(xì)胞周期影響。
　　 結(jié)果：
　　 1.成功培養(yǎng)出人牙周膜成纖維細(xì)胞,經(jīng)抗波形幺幺蛋白、抗角蛋白染色確定:抗波形幺幺蛋白陽(yáng)性,抗角蛋白陰性。
　　 2.實(shí)驗(yàn)室采用化學(xué)沉

4、淀法制備出納米羥基磷灰石,經(jīng)粒徑檢測(cè)所得納米弳基磷灰石粒徑在20-40 nm符合本次實(shí)驗(yàn)所需。通過(guò)比較六偏磷酸鈉和羧甲基纖維素鈉的對(duì)納米羥基磷灰石的分散效果,可以得出六偏磷酸鈉能更好地分散納米羥基磷灰石,但進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),采用六偏磷酸鈉分散納米羥基磷灰石進(jìn)行培養(yǎng)卻導(dǎo)致了大量人牙周膜成纖維細(xì)胞的死亡,而羧甲基纖維素鈉分散的納米羥基磷灰石組細(xì)胞生長(zhǎng)良好。因此選用羧甲基纖維素鈉作為分散劑配置納米羥基磷灰石懸浮液,進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
　　

5、3.MTT法檢測(cè)不同濃度的分組以及多重對(duì)照組的細(xì)胞增殖情況,發(fā)現(xiàn)0.5％濃度的納米羥基磷灰石懸浮液組對(duì)細(xì)胞增殖情況較其他組效果明顯。在相同濃度(0.1％)下,納米羥基磷灰石懸浮液組對(duì)細(xì)胞的增殖作用優(yōu)于單獨(dú)納米羥基磷灰石組。
　　 4.采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示納米羥基磷灰石懸浮液組可以減少處于G0/G1期的細(xì)胞數(shù)量,增加處于S期的細(xì)胞數(shù)量,使人牙周膜成纖維細(xì)胞在細(xì)胞增殖周期中很快完成G0/G1期向S的過(guò)渡。
　　 結(jié)論：

6、
　　 1.納米羥基磷灰石懸浮液對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞的增殖有明顯的促進(jìn)作用。在細(xì)胞培養(yǎng)允許的滲透濃度內(nèi),濃度越高對(duì)細(xì)胞增殖的促進(jìn)作用越明顯,而且納米羥基磷灰石對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞增殖的促進(jìn)作用在前24h最為明顯。
　　 2.納米羥基磷灰石懸浮液作用于人牙周膜成纖維細(xì)胞,可以縮短細(xì)胞處于G0/G1的時(shí)間,使較大量的細(xì)胞進(jìn)入S期,進(jìn)行有絲分裂,加速了HPDLCs的增殖速度。
　　 3.通過(guò)本研究,進(jìn)一步肯定了nHA運(yùn)