雞IFN-α-IL-18與綠原酸復(fù)合制劑及其抗IBDV作用.pdf

1、雞傳染性法氏囊?。↖BD）是由傳染性法氏囊病毒（IBDV）引起的一種高度接觸性傳染性疾病，對養(yǎng)雞業(yè)危害極大。一些細胞因子和中藥活性成分具有抑制病毒繁殖和增強機體免疫效力的生物學(xué)活性。課題組前期研究證明，重組雞IFN-α-IL-18融合蛋白對IBDV具有顯著的抑制作用。本實驗擬將重組IFN-α-IL-l8酵母菌和具有抗炎、抗病毒和免疫增強作用的綠原酸（Chlorogenic acid）配合，探尋綠原酸的最佳劑量，檢測復(fù)合制劑中IFN-α-

2、IL-l8重組菌在雞體內(nèi)、外的穩(wěn)定性，研究復(fù)合制劑抗IBDV效果和對免疫細胞信號分子的影響。
　　1．重組IFN-α-IL-l8酵母菌與綠原酸復(fù)合制劑中重組菌體內(nèi)、外穩(wěn)定性檢測
　　為研究重組IFN-α-IL-l8酵母菌與綠原酸的復(fù)合制劑在臨床上的應(yīng)用，將重組IFN-α-IL-l8酵母菌分別與不同濃度的綠原酸進行配伍，一部分在4℃條件下儲存并在不同時間涂布于固體選擇培養(yǎng)基上檢測重組菌的活力；另一部分經(jīng)口服投送10日齡雛雞，在

3、不同的時間刮取雛雞的小腸粘膜，并抽取其浸出液涂布于固體選擇培養(yǎng)基上，觀察培養(yǎng)基菌落并計數(shù)，計算重組菌的存活率。結(jié)果表明，IFN-α-IL-l8重組菌與10 mg/kg綠原酸配合，在雞體內(nèi)存活率最大，為28.8％，存活率隨著時間的延長逐漸降低；在體外較低濃度的綠原酸對重組IFN-α-IL-l8的生存影響不是很大，40 mg/kg的綠原酸對重組IFN-α-IL-l8酵母菌的生存具有一定的影響。
　　2．重組IFN-α-IL-l8酵母菌

4、與綠原酸抗IBDV效果及其對免疫細胞信號分子的影響
　　為了進一步探討重組IFN-α-IL-l8酵母菌與綠原酸抗IBDV效果及其對免疫細胞信號分子的影響，本研究將140只10日齡個體大小相近的非免疫雛雞，隨機分為4組，第一組口服無菌的生理鹽水，第二組口服綠原酸，第三組口服重組酵母菌，第四組口服重組酵母菌與綠原酸復(fù)合制劑。觀察雛雞生長情況，檢測并計算免疫器官生長指數(shù)；依據(jù)發(fā)病雞數(shù)和病死雞數(shù)評估IBDV攻毒后對雞只的保護率；檢測攻毒后

5、雞外周血淋巴細胞增殖活性和免疫細胞信號分子PI3K、NF-κB p65表達水平以及血清中 IBDV含量。結(jié)果表明，重組 IFN-α-IL-18酵母菌與綠原酸復(fù)合制劑對雛雞的生長沒有影響，但可以刺激雛雞的免疫器官的生長與發(fā)育；復(fù)合制劑可明顯抑制IBDV在雞體內(nèi)的增值（P<0.05），顯著降低發(fā)病率和死亡率；復(fù)合制劑對促進淋巴細胞的增殖有明顯的作用，并能促進淋巴細胞內(nèi)的 PI3K（P<0.01）的表達和NF-κB（P<0.01）的活化。

6、r>　　結(jié)論：重組IFN-α-IL-l8酵母菌與綠原酸復(fù)合制劑中的重組菌在4℃儲存條件下至少能生存14d，在雞體腸道內(nèi)有一定的定植能力，并能維持兩周左右，為重組IFN-α-IL-l8酵母菌在體內(nèi)的持續(xù)表達奠定了基礎(chǔ)；復(fù)合制劑對免疫細胞信號分子PI3K的表達和NF-κB活化有顯著影響，并促進淋巴細胞增殖，對IBDV在雞體的增殖有抑制作用，提高機體抵抗IBDV感染的能力。本研究為進一步探索重組IFN-α-IL-18酵母菌和綠原酸抗病毒作用及