體外培養(yǎng)中CSA對缺氧復氧所致MSCs凋亡的影響和機制初探.pdf

1、骨髓間充質(zhì)干細胞(MSCs)是組織工程研究中普遍采用的種子細胞.于1867年德國病理學家Cohnheim首次提出骨髓中存在MSCs,隨研究進一步深入,人們發(fā)現(xiàn)這種細胞能分化為多種間充質(zhì)細胞并形成骨、軟骨、肌腱、脂肪等組織,甚至可被誘導形成心肌細胞,加之其易于獲取、具有免疫耐受性、能長期存活、易于轉(zhuǎn)染并能長期表達外源基因等特點,干細胞應用研究日益引起科學家們的關注.目前MSCs在臨床上已開始實驗性用于心臟修復,但由于局部微環(huán)境促凋亡因素的

2、存在使其在移植后不可避免出現(xiàn)凋亡.而已有許多基礎實驗和臨床研究證實環(huán)胞霉素A (CSA)可以減少多個細胞系發(fā)生的凋亡,CSA對MSCs是否也具有相近的作用目前尚不得而知.本實驗采取不同濃度CSA處理大鼠MSCs后,在體外環(huán)境中給予缺氧再復氧后應用多個方法檢測其凋亡的情況并初步測定部分有關的凋亡通路上關鍵因子初步解釋其可能的抗凋亡機制. 方法：采用密度梯度離心法分離獲取SD大鼠的MSCs,再以貼壁篩選法純化MSCs.取傳代后第三代

3、細胞進行流式細胞學鑒定,進入實驗.先采取不同濃度(0.5.5μmol/L)CSA對MSCs進行預處理,實驗組根據(jù)CSA濃度分為(0 uM CSA組,0.5 uMCSA組,1uM CSA組,2.5uM CSA組,5uM CSA組)以及常規(guī)培養(yǎng)組.然后實驗組在體外環(huán)境中給予缺氧再復氧(H/R)后和常規(guī)培養(yǎng)組應用多個方法檢測其凋亡的情況,并檢測細胞色素C的釋放和caspase-3的活性,線粒體膜電位(△ψm)的變化. 結(jié)果：在缺氧復氧