環(huán)孢素A(CsA)對體外培養(yǎng)人系膜細胞增殖的影響機制的研究.pdf

1、目的：
　　 1、觀察環(huán)孢素A(CsA)對人系膜細胞增殖、細胞周期的影響,及對細胞周期相關(guān)蛋白cyclinD1、cyclinE、p27kip1表達的影響;
　　 2、初步探討CsA對人系膜細胞增殖的影響機制。
　　 方法：
　　 3、7℃恒溫水浴箱中復蘇凍存的系膜細胞,并將細胞移入50ml培養(yǎng)瓶中置于37℃、5％C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。當系膜細胞生長至80％貼壁時,傳代并繼續(xù)培養(yǎng),傳至3-4代后,細胞活力較強

2、,用于實驗。
　　 分實驗組和對照組,實驗組加入不同濃度CsA(0.1,1,5μmol/L),對照組不加CsA處理。第一步實驗:用MTT法在490nm波長處檢測不同濃度的CsA分別作用24h、48h、72h后的吸光度值,觀察藥物對系膜細胞增殖抑制作用。第二步實驗:不同濃度的CsA作用48h后,采用流式細胞儀檢測細胞周期Go/Gi(DNA合成前期)與S(DNA合成期)的影響。第三步實驗:不同濃度的CsA作用48h后,提取細胞蛋白,

3、Westemblot法檢測細胞中cyclinD1、cyclinE、p27kip1蛋白表達情況。
　　 結(jié)果：
　　 1、不同濃度CsA作用24h,48h,72h后,隨著CsA濃度的增加及時間的延長,人系膜細胞的增殖抑制越來越明顯;與對照組相比,各濃度均有明顯抑制作用,且不同藥物濃度均以72h抑制作用最為明顯,差異均具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 2、CsA可阻滯細胞周期,使Go/Gi期細胞比增多,S期細胞

4、比減少,且隨著藥物濃度的增加,Go/Gi期所占百分比逐漸增高,S期所占百分比逐漸降低,差異均具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 3、系膜細胞經(jīng)CsA處理48h后,Westom印跡檢測結(jié)果顯示:與對照組相比,各實驗組cyclinDl、cyclinE蛋白表達下降、p27kip1蛋白表達升高;且實驗組隨CsA濃度的增加,cyclinDI、cyclinE蛋白表達遞減、p27kiP1蛋白表達遞增,差異均具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。