七氟烷預(yù)處理對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在缺氧復(fù)氧環(huán)境下增殖和凋亡的影響.pdf

1、目的
　　器官缺血可以引起其細(xì)胞不可逆性損傷，是致殘致死的一個(gè)主要原因。因此，對(duì)缺血組織的保護(hù)成為近來研究的熱點(diǎn)，而近些年來，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療獲得了極好的效果，引起了越來越多的關(guān)注與研究。隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療尚存著一些需要解決的問題。其中較為嚴(yán)峻的是移植后的干細(xì)胞的生存率低，文獻(xiàn)報(bào)道心肌缺血干細(xì)胞移植治療中，移植后進(jìn)入體內(nèi)的干細(xì)胞在第一個(gè)24小時(shí)內(nèi)存活率低于1％。因此，如何提高缺血缺氧環(huán)境下大鼠骨髓間充質(zhì)干

2、細(xì)胞生存率成為干細(xì)胞移植療法一個(gè)亟待解決的問題。
　　七氟烷是目前臨床上一種較理想的吸入性麻醉藥。近年來，人們通過研究不斷證實(shí)七氟烷預(yù)處理或后處理對(duì)于多種組織細(xì)胞缺血再灌注有保護(hù)作用，如心肌細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞等。最近，有報(bào)道稱低濃度的七氟烷短暫預(yù)處理人干細(xì)胞樣內(nèi)皮祖細(xì)胞在體外實(shí)驗(yàn)中能促進(jìn)其集落形成，提高其增值能力。但是七氟烷對(duì)缺氧復(fù)氧環(huán)境下骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bonemarrowmesenchymalstemcel

3、ls，BMSCs)有何作用還未見報(bào)道。因此，本實(shí)驗(yàn)通過體外復(fù)制干細(xì)胞移植后缺血組織的缺血缺氧微環(huán)境，旨在探討七氟烷預(yù)處理對(duì)缺氧復(fù)氧環(huán)境下大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞凋亡和增殖能力的影響，為更好的應(yīng)用BMSCs治療缺血再灌注損傷提供線索。
　　方法
　　采取全骨髓貼壁法分離培養(yǎng)SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，通過流式細(xì)胞儀分析表面標(biāo)記CD29、CD90、CD45、CD34。采用缺氧盒模擬大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外缺氧條件，并行血清剝奪以模擬體

4、內(nèi)缺血環(huán)境，建立體外缺氧復(fù)氧模型。應(yīng)用吸入性麻醉藥七氟烷進(jìn)行預(yù)處理。選取第三代細(xì)胞隨機(jī)分為3組:組1空白對(duì)照組;組2缺氧/復(fù)氧組H/R(缺氧24h，復(fù)氧24h);組3七氟醚預(yù)處理組(2％七氟醚預(yù)處理2h后，缺氧24h，復(fù)氧24h)。對(duì)各組細(xì)胞行胰蛋白酶消化制成單細(xì)胞懸液，AnnexinⅤ-FITC/PI雙染后流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡率，JC-1染色后流式細(xì)胞儀檢測(cè)線粒體膜電位，PI染色后檢測(cè)細(xì)胞周期。
　　結(jié)果
　　流式細(xì)胞儀An

5、nexinⅤ-FITC和PI雙染結(jié)果顯示，3組間凋亡率有顯著性差異P＜0.05。組1在正常環(huán)境下培養(yǎng)，凋亡細(xì)胞數(shù)量較少。組2在缺氧血清剝奪24h后細(xì)胞凋亡率升高。七氟烷預(yù)處理后BMSCs在缺氧/復(fù)氧后凋亡細(xì)胞數(shù)目減少。流式細(xì)胞儀檢測(cè)線粒體膜電位JC-1染色表明，組2線粒體膜電位損傷細(xì)胞比例明顯高于組1和組3，有顯著差異。與對(duì)照組相比，H/R組G1期細(xì)胞增加，S期細(xì)胞比例明顯減少;SP組與H/R組相比G1期細(xì)胞減少，S期細(xì)胞例比增高。