不同溫度控制條件下兔VX2肝腫瘤射頻消融后不同區(qū)域細胞凋亡和增殖的實驗研究.pdf

1、研究背景及目的:目前射頻消融已成為肝臟原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性肝癌有效治療方法之一。射頻消融治療主要是利用高頻交流電流(350-500KHz)使細胞組織內(nèi)離子產(chǎn)生震蕩摩擦生熱,導(dǎo)致細胞損傷壞死。當溫度超過60℃會使細胞內(nèi)蛋白質(zhì)和脂質(zhì)雙分子層變性,從而導(dǎo)致細胞不可逆性死亡。當在較低溫度下(50℃～55℃),射頻治療4～6 d可造成細胞不可逆的損傷。因此有必要對不同溫度控制條件下肝癌射頻消融后殘瘤細胞活性變化規(guī)律進一步研究。
　　本實驗通過對不

2、同溫度控制條件下射頻消融兔肝VX2腫瘤后靶區(qū)內(nèi)腫瘤細胞凋亡、增殖變化情況,探討不同溫控條件下射頻消融對惡性腫瘤組織細胞活性的影響情況,為肝惡性腫瘤射頻消融治療提供實驗依據(jù)。
　　材料與方法:對健康新西蘭大白兔行開腹肝左葉種植VX2瘤株,建立兔VX2肝腫瘤模型。對照組6只,實驗組72只,在兔接種VX2瘤株14 d后行肝臟CT平掃及雙期增強掃描,以確定VX2瘤株接種是否成功。3 w后腫瘤直徑約2.0～2.5 cm,將對照組6只處死,取

3、肝內(nèi)腫瘤組織行病理檢查。實驗組中分為三組(n=24)。每組皆在開腹下行射頻消融術(shù)。第一組條件:射頻針溫度50℃～70℃,射頻電壓48 v,治療時間15 min。第二組條件:射頻針溫度70℃～90℃,射頻電壓48 v,治療時間15 min。第三組條件:射頻針溫度90℃～110℃,射頻電壓48 v,治療時間15 min。術(shù)后即刻、1 d、3 d、1 w、2 w、3 w,共6個時間段處死(n=6)。將殘瘤大體標本分為:針道炭化區(qū)、熱凝固區(qū)、充

4、血出血區(qū)(消融邊界區(qū)),三區(qū)標本分別置入10％福爾馬林浸泡,然后脫水、烘干、石蠟包埋,行HE染色、tunel、PCNA免疫組化檢測。術(shù)中觀察腹腔內(nèi)、肺轉(zhuǎn)移情況。分析瘤體經(jīng)過不同溫度RFA治療后,不同區(qū)帶內(nèi)腫瘤細胞活性變化特點。
　　結(jié)果:
　　1.本組實驗中78只新西蘭兔,肝內(nèi)接種成功77只(成瘤率98.7%),腫瘤病灶直徑約2.0～2.5 cm;2只分別在種植后第7、10 d死亡,發(fā)現(xiàn)腹腔轉(zhuǎn)移灶2只。接種未成功的和死亡的予

5、以補種。
　　2.HE染色:針道碳化區(qū):三組標本(50℃～110℃)光鏡下見大量腫瘤細胞結(jié)構(gòu)消失,胞核固縮、核碎裂、部分腫瘤細胞溶解液化。熱凝固區(qū):(1)50℃～70℃組:1 w后見較多存活的腫瘤細胞和炎性細胞;3 w后見到大量存活的腫瘤細胞。(2)第二、三組(70℃～110℃):1～3 d后見到大量凝固壞死細胞和少量壞死細胞;1 w后,熱凝固區(qū)逐漸變成白色并與周圍區(qū)域分界欠清,炎性細胞浸潤明顯;3 w后可見部分存活腫瘤細胞。充血

6、出血區(qū):(1)50℃～70℃組:2 w后見交界區(qū)內(nèi)較多的腫瘤細胞,其形態(tài)及分布較規(guī)則,細胞輕度水腫,肝竇間隙見大量紅細胞;3 w后可見大量腫瘤細胞。(2)第二、三組(70℃～110℃):2 w后見少許腫瘤細胞存在并見少量纖維增生;3 w后可見較多腫瘤細胞。
　　3.RFA術(shù)后兔VX2肝腫瘤凋亡的TUNEL法檢測結(jié)果:(1)50℃～70℃組凋亡指數(shù)(AI):針道區(qū)為0.22±0.19,熱消融區(qū)為0.38±0.17,交界區(qū)為0.39±

7、0.11;(2)70℃～90℃組AI:針道區(qū)為0.28±0.09,熱消融區(qū)為0.54±0.07,交界區(qū)為0.59±0.10;(3)90℃～110℃組AI:針道區(qū)為0.30±0.07,熱消融區(qū)為0.60±0.17,交界區(qū)為0.61±0.12;與對照組(AI:0.05±0.07)比較有明顯意義(P<0.05)。三組針道區(qū)6個時間點相比較無明顯差異(P>0.05)。第二、三組熱消融凝固區(qū)和充血出血區(qū)(交界區(qū))凋亡指數(shù)相比較(P>0.05)無明

8、顯差異,第一組和二、三組熱消融凝固區(qū)和充血出血區(qū)(交界區(qū))凋亡指數(shù)相比較在術(shù)后即刻、1 d、3 d相比較(P<0.05)有差異,在1 w和3 w相比較(P>0.05)無明顯差異。和對照組比較(P﹤0.05)有統(tǒng)計學(xué)愿意。
　　4.RFA術(shù)后兔VX2肝腫瘤增殖的PCNA檢測結(jié)果:第一組(針道區(qū)、熱消融區(qū)、充血出血區(qū))各區(qū)域在不同時間點增值指數(shù)(PI)與對照組(PI:0.20±0.29)比較(P<0.05)有明顯統(tǒng)計學(xué)意義。其針道炭化

9、區(qū)在即刻、1 d后PI無較大變化;熱凝固區(qū)在2 w后PI指數(shù)恢復(fù)到術(shù)前對照水平;充血出血區(qū)在2 w時PI明顯升高,PI與術(shù)前對照組相比(P>0.05)無明顯差別。第二、三組三區(qū)帶(針道區(qū)、熱消融凝固區(qū)、充血出血區(qū))內(nèi)各區(qū)域在不同時間點增值指數(shù)(PI)與術(shù)前對照組比較(P<0.05)有明顯統(tǒng)計學(xué)意義。其中針道炭化區(qū)在即刻、1 d后PI數(shù)值無較大變化;熱凝固區(qū)在3w后PI指數(shù)恢復(fù)到術(shù)前對照水平;交界區(qū)在1 w時PI升高,在2 w時PI明顯升

10、高(P<0.05),但仍低于對照組,在3 w后PI則高于對照組。各區(qū)域之間PI比較在2w后有明顯差別。
　　結(jié)論:
　　1.兔VX2肝腫瘤模型改良法具有復(fù)制簡單、成功率高、成瘤周期短等的特點,可較好地應(yīng)用于肝癌射頻消融的實驗研究。
　　2.射頻消融溫度在50℃～110℃范圍內(nèi)對兔VX2肝腫瘤針道區(qū)內(nèi)腫瘤細胞基本能達到滅活作用;
　　3.射頻消融溫度在50℃～70℃范圍內(nèi),兔VX2肝腫瘤的邊界區(qū)在2w后仍出現(xiàn)增值能