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文檔簡介
1、一、背景 手術(shù)切除是許多惡性腫瘤的首選治療方法;然而常常由于肝功能的嚴(yán)重?fù)p害、肝外轉(zhuǎn)移、門靜脈的浸潤及嚴(yán)重肝外疾病等原因;肝癌患者中能接受手術(shù)治療的只有20%左右。大部分患者不得不使用一些非手術(shù)治療,因此一些以局部消融為特點(diǎn)的治療手段,如射頻消融治療(radiofrequency ablation,RFA)、微波凝固、激光治療、聚焦超聲等成為了腫瘤治療的研究熱點(diǎn)。其中,射頻消融治療因其具有微創(chuàng)、安全、有效、可重復(fù)、操作簡單等優(yōu)點(diǎn)
2、,在原發(fā)性、繼發(fā)性肝癌局部治療中獲得了最廣泛的接受。 射頻消融治療是一種使腫瘤內(nèi)部溫度達(dá)到50℃以上,造成凝固性壞死的局部熱療技術(shù)。它是將射頻治療儀產(chǎn)生的高頻電流,通過電極直接傳導(dǎo)至腫瘤內(nèi)部轉(zhuǎn)化成熱能;最終達(dá)到破壞腫瘤目的治療手段。盡管目前RFA已被廣泛用于治療各種肝臟腫瘤,并取得了好的效果;但在射頻消融治療過程中,常常由于受到腫瘤大小、數(shù)量、解剖定位及其他因素的限制,而行成不完全的毀損即殘癌的發(fā)生。根據(jù)研究報(bào)道統(tǒng)計(jì)顯示,總體單
3、次完全壞死率約為50%-93%;直徑<3cm、3~5cm、>5cm的肝癌,單次治療完全壞死率分別約為77%~1000A,、84%-93.5%、41%~71%左右。特殊位置的腫瘤射頻消融治療后殘癌發(fā)生率更高;Pawlik研究發(fā)現(xiàn)靠近肝靜脈、門靜脈的腫瘤,單次RFA治療后殘癌率分別約33%、57%;腔靜脈周圍的腫瘤;單次RFA后殘癌發(fā)生率達(dá)100%。較高的殘癌發(fā)生率已經(jīng)成為限制RFA發(fā)展的重要因素之一。 面對(duì)較高的殘癌發(fā)生率;已有越
4、來越多的研究人員開始了對(duì)RFA后殘癌生物學(xué)行為的關(guān)注;然而研究結(jié)果卻存在較大差異。van Duinhoyen利用大鼠肝臟接種cc531結(jié)腸癌腫瘤細(xì)胞構(gòu)建肝轉(zhuǎn)移癌模型,行射頻消融治療;研究發(fā)現(xiàn)RFA明顯抑制了腫瘤的生長及轉(zhuǎn)移;并認(rèn)為這種改變可能與術(shù)后免疫力的提高有關(guān)。P.vonBrejtenbuch將CT-26腫瘤細(xì)胞注射到小鼠肝臟右葉,建立肝轉(zhuǎn)移瘤模型;5天后行射頻消融或手術(shù)切除治療,同時(shí)再次向肝內(nèi)注射綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)染的CT-26腫瘤細(xì)
5、胞;研究發(fā)現(xiàn)RFA較手術(shù)切除明顯促進(jìn)了殘癌的生長。并且有臨床研究發(fā)現(xiàn)RFA術(shù)后腫瘤的轉(zhuǎn)移和增殖明顯加快。射頻消融對(duì)殘癌的增殖和轉(zhuǎn)移能夠產(chǎn)生何種影響呢? 目前尚無定論;但這些研究均懷疑認(rèn)為RFA后殘癌增殖及轉(zhuǎn)移能力的變化,與術(shù)后全身及局部微環(huán)境的改變或治療對(duì)血管的損傷有關(guān),如免疫力的提高、細(xì)胞因子的改變、血管的穿刺損傷或腫瘤內(nèi)部壓力的增加等。那么RFA能否引起殘癌細(xì)胞自身增殖及轉(zhuǎn)移能力的改變呢? 二、研究目的 本研
6、究通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn),觀察射頻消融后VX2殘癌細(xì)胞的增殖及轉(zhuǎn)移能力的變化;研究RFA后腫瘤細(xì)胞增殖及轉(zhuǎn)移能力的變化。 三、實(shí)驗(yàn)方法與主要結(jié)果 1.兔VX2腫瘤體內(nèi)轉(zhuǎn)移的模型建立與評(píng)價(jià) 采用移植的方法將VX2腫瘤接種于新西蘭兔脾臟;術(shù)后2、3、4周分別處死6只動(dòng)物,觀察腫瘤的體積、重量、病理改變及轉(zhuǎn)移情況,記錄荷瘤動(dòng)物的自然生存時(shí)間。結(jié)果:①、腫瘤接種成功率100%,術(shù)后2周平均腫瘤體積及重量分別為278.28±55.7
7、7mm<'3>、0.31±0.07g。②、腫瘤呈圓形,無明顯包膜;直徑超過1cm的腫瘤中心可見明顯壞死;鏡下細(xì)胞排列紊亂,呈浸潤性生長。③、術(shù)后2~3周腫瘤可發(fā)生肝、肺、腹腔淋巴結(jié)等廣泛轉(zhuǎn)移。④、荷瘤動(dòng)物平均生存時(shí)間為56±6.07天;死亡原因均為腫瘤生長、轉(zhuǎn)移引起的多臟器衰竭。 2.射頻消融后殘癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力的觀察 通過移植方法建立兔肝VX2腫瘤模型,兩周后行控制條件下的射頻消融治療,通過控制腫瘤周邊溫度在43-45℃
8、并維持30分鐘<'[38]>;人為造成殘癌。將殘癌組織及未經(jīng)RFA處理的VX2腫瘤組織分別接種于18只新西蘭兔脾臟,建立實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組。術(shù)后2、3、4周各組分別處死6只動(dòng)物;觀察肝轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)的數(shù)目;并對(duì)腫瘤組織免疫組化染色,計(jì)數(shù)癌細(xì)胞中E-cad、MT1-MMP陽性表達(dá)指數(shù)。各組另有6只荷瘤動(dòng)物,正常飼養(yǎng)至死亡,記錄生存時(shí)間并解剖。結(jié)果:①術(shù)后2、3、4周肝臟轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)目,兩組問無明顯差別。②荷瘤動(dòng)物平均自然生存時(shí)間,試驗(yàn)組比對(duì)照組稍短(
9、50±13.4天、56±6.07天,P=0.40),但差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。③術(shù)后2、3、4周腫瘤細(xì)胞E-cad陽性表達(dá)指數(shù),兩組間無明顯差別。④術(shù)后2周對(duì)照組腫瘤細(xì)胞MT1-MMP陽性表達(dá)指數(shù)明顯大于實(shí)驗(yàn)組(91.5±5.65%,82.2±4.79%P=0.01);術(shù)后3、4周腫瘤細(xì)胞MT1-MMP陽性表達(dá)指數(shù),兩組間無明顯差別。 3.射頻消融后殘癌細(xì)胞增殖能力的觀察 建立兔肝VX2腫瘤模型,行控制條件下的射頻消融治療,人
10、為造成殘癌;將殘癌組織接種于兔脾臟觀察其增殖能力。殘癌組織及未經(jīng)RFA處理的VX2腫瘤組織分別接種于18只新西蘭兔脾臟,建立實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組。術(shù)后2、3、4周各組分別處死6只動(dòng)物,觀察腫瘤體積、重量及測定腫瘤細(xì)胞增殖指數(shù)。結(jié)果:①術(shù)后2周對(duì)照組腫瘤體積、重量均明顯大于實(shí)驗(yàn)組(278.27±55.77mm<'3> vs 100.31±25.51 mm<'3>P=0.02:0.3049±0.071g vs 0.1191±0.095g P=0.
11、04)。②術(shù)后3、4周腫瘤體積及重量,兩組問無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差別。③術(shù)后2、3、4周腫瘤細(xì)胞的增殖指數(shù),兩組間無明顯差別。 四、結(jié)論 1.兔VX2腫瘤體內(nèi)轉(zhuǎn)移模型,具有復(fù)制簡單、成功率高、成瘤及轉(zhuǎn)移周期短、模型穩(wěn)定等特點(diǎn);是在具有正常免疫能力的大動(dòng)物體內(nèi)建立的,良好的腫瘤細(xì)胞體內(nèi)轉(zhuǎn)移模型。 2.兔脾臟是VX2腫瘤傳代、增殖的良好載體;兔脾臟接種VX2腫瘤后短時(shí)間內(nèi),可作為良好的脾臟腫瘤模型。 3.射頻消融治療
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