熱消融及超聲介導(dǎo)長春瑞濱長循環(huán)熱敏脂質(zhì)體靶向釋放增強(qiáng)治療兔VX2腫瘤的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分兔VX2后肢肌內(nèi)腫瘤模型的建立及其生物學(xué)評價
　　目的:兔VX2腫瘤細(xì)胞株已廣泛應(yīng)用在兔的肝、腎、骨及腦等部位制成腫瘤模型,但是接種于肌肉內(nèi)建立的腫瘤模型經(jīng)常作為傳種之瘤株很少用于實(shí)驗(yàn)研究。建立兔VX2肌肉腫瘤模型并觀察其生物學(xué)特性。
　　方法:①實(shí)驗(yàn)材料:2-3個月齡純種健康新西蘭兔30只,體重1.5~2.0kg,②實(shí)驗(yàn)過程:采用組織塊包埋法,將 VX2腫瘤組織移植于30只新西蘭大白兔大腿股外側(cè)肌肉內(nèi)建立肌肉內(nèi)腫瘤

2、模型。③評估:一組隨機(jī)取15只荷瘤兔,分別在接種腫瘤后7、10、14、21、26d行超聲檢查;計(jì)算腫瘤體積(V)=0.5×ab2其中a、b表示腫瘤的長徑和短徑以平均TV值繪制腫瘤生長曲線。計(jì)算腫瘤生長率(TGR),根據(jù)公式TGR=(a2b2-a1b1)/a1b1×100％計(jì)算。另一組15只荷瘤兔分別于10、15、20、25、30d隨機(jī)處死3只荷瘤兔,剝除腫瘤,測量腫瘤體積,并與超聲測量結(jié)果比較。病理檢查腫瘤的組織學(xué)特性。
　　結(jié)果

3、:30只兔肌肉腫瘤模型均制作成功進(jìn)入結(jié)果分析。①建立的兔VX2肌肉腫瘤模型成瘤率高達(dá)100%,接種7~10d,腫瘤生長迅速,生長率為56.7%,14~21d腫瘤再次迅速增長生長率為97.2%。②移植腫瘤組織后7天,二維超聲示部分荷瘤兔后肢肌肉內(nèi)可見等回聲或偏低回聲結(jié)節(jié);至14天左右,所有荷瘤兔肌肉均內(nèi)探及等回聲或偏低回聲結(jié)節(jié),輪廓規(guī)整邊界清,其內(nèi)回聲分布均勻,并可見稀疏彩色血流信號,腫物周邊可見較豐富的彩色血流環(huán)繞,20天左右,一部分腫

4、瘤內(nèi),回聲分布不均,可探及小片狀液性暗區(qū)及斑片樣強(qiáng)回聲鈣化灶;并且隨著腫時間的延長,壞死區(qū)域逐漸增多。③病理組織學(xué)觀測:鏡下可見腫瘤細(xì)胞生長旺盛,與片狀壞死區(qū)分界清晰,壞死區(qū)域內(nèi)腫瘤細(xì)胞體積明顯增大,細(xì)胞密度降低,排列不齊,狀態(tài)不規(guī)整,細(xì)胞核深染,分裂象較多,壞死區(qū)域內(nèi)腫瘤細(xì)胞核固縮、碎裂。④剝除腫瘤,測量腫瘤體積,并與超聲測量結(jié)果比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:此模型移植成功率高,建模時間短且腫瘤生長迅速,腫瘤血供豐富。是一

5、種較為理想的用于研究腫瘤局部治療的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?br>　　第二部分低功率射頻靶向釋放長春瑞濱長循環(huán)熱敏脂質(zhì)體在兔VX2腫瘤的治療研究
　　目的:利用射頻技術(shù)精確的定位和熱效應(yīng)靶向釋放攜載化療藥物的熱敏脂質(zhì)體在兔VX2腫瘤治療中的療效。
　　方法:應(yīng)用組織塊包埋法建立新西蘭大白兔股部肌肉內(nèi) VX2腫瘤模型。待腫瘤生長至0.8~1.0cm時,根據(jù)腫瘤大小按區(qū)組隨機(jī)的方法將36只荷瘤兔分成4組。對照組(CON):靜脈注射等量生理鹽水

6、。低功率射頻組(RF):輸出功率1W,30min,靶溫度42~43℃。長春瑞濱長循環(huán)熱敏脂質(zhì)體組(V-LCTL):給予1.8mg/kg長春瑞濱長循環(huán)熱敏脂質(zhì)體。長春瑞濱長循環(huán)熱敏脂質(zhì)體聯(lián)合低功率射頻組（RF+V-LCTL):功率1W,時間30min,低功率射頻前給予1.8mg/kg長春瑞濱長循環(huán)熱敏脂質(zhì)體。治療間隔時間為2天,即:在荷瘤兔分組后的第1、4、7天。治療前及治療后超聲連續(xù)觀測腫瘤的大小,治療后采用高效液相色譜(HPLC)法測

7、定長春瑞濱靜脈注射后在體內(nèi)各組織內(nèi)的分布。治療結(jié)束后8d,處死實(shí)驗(yàn)兔,處死動物前抽取VX2兔靜脈血,行血常規(guī)檢查,獲得不同實(shí)驗(yàn)組白細(xì)胞及血小板的計(jì)數(shù)。標(biāo)本分別做HE染色和Western blotting方法檢測蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:所有實(shí)驗(yàn)兔均能耐受治療完成實(shí)驗(yàn)。RF+V-LCTL組抑瘤率為70.3%,顯著高于RF和V-LCTL組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);低功率射頻組無明顯消融效果。病理檢查顯示低功率射頻作用無明顯腫瘤壞

8、死,而RF+V-LCTL組可見明顯的腫瘤細(xì)胞損傷及壞死。并且實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明RF+V-LCTL組在給藥24h后相比V-LCTL組在腫瘤組織長春瑞濱濃度最高,而心臟、肺臟組織中的長春瑞濱濃度最低。腫瘤細(xì)胞凋亡的檢測。V-LCTL組和RF+V-LCTL組均可明顯升高Caspase-3活性片段,Bax的表達(dá)水平,降低Bcl-2的表達(dá)水平。
　　結(jié)論:與低功率射頻治療組及長春瑞濱熱長循環(huán)熱敏脂質(zhì)體治療組相比,低功率射頻靶向釋放長春瑞濱熱長循環(huán)

9、熱敏脂質(zhì)體對兔VX2腫瘤具有明顯的抑瘤效果,較好的藥物靶向性、和最低的心肺毒副作用。該聯(lián)合治療可擴(kuò)大射頻消融的治療區(qū)域,對減少射頻消融后腫瘤復(fù)發(fā)有重要意義。
　　第三部分高強(qiáng)度聚焦超聲靶向釋放長春瑞濱長循環(huán)熱敏脂質(zhì)體抗腫瘤的實(shí)驗(yàn)研究
　　目的:應(yīng)用HIFU作為靶向釋放熱源,探討HIFU靶向釋放長春瑞濱長循環(huán)熱敏脂質(zhì)體聯(lián)合抗腫瘤的療效。
　　方法:應(yīng)用組織塊包埋法建立新西蘭大白兔股部肌肉內(nèi)VX2腫瘤模型。待腫瘤直徑至0.

10、8~1.0cm時,按區(qū)組隨機(jī)的方法將24只荷瘤兔分成4組。對照組(CON)、單純 HIFU組、長春瑞濱熱敏脂質(zhì)體組(V-LCTL)、HIFU聯(lián)合長春瑞濱熱敏脂質(zhì)體組(HIFU+V-LCTL)。治療間隔時間為2天,即:在荷瘤兔分組后的第1、3、5天。治療后,觀察腫瘤體積和重量變化,計(jì)算抑瘤率。治療結(jié)束后8d,處死動物,處死動物前抽取VX2兔靜脈血,行血常規(guī)檢查,獲得不同實(shí)驗(yàn)組白細(xì)胞及血小板的計(jì)數(shù)。并對腫瘤進(jìn)行Western blottin

11、g方法檢測蛋白表達(dá),同時送病理進(jìn)行HE染色,觀察腫瘤組織病理形態(tài)學(xué)變化。
　　結(jié)果:各組荷瘤兔的腫瘤生長曲線:對照組腫瘤生長最快,HIFU組與對照組腫瘤體積增長趨勢相當(dāng),V-LCTL組和HIFU+V-LCTL組腫瘤生長均受到明顯抑制,且腫瘤體積較其他兩組明顯縮小。并且 HIFU+V-LCTL組與 V-LCTL組相比,HIFU+V-LCTL組腫瘤體積縮小顯著。HIFU+V-LCTL組的抑瘤率為71.0%,顯著高于HIFU組和V-LC

12、TL組(0.8%和47.1%,P<0.05)。V-LCTL組和HIFU+V-LCTL組Caspase-3活性片段和Bax的表達(dá)水平明顯升高,同時Bcl-2的表達(dá)水平顯著降低。病理結(jié)果顯示對照組和單純HIFU組腫瘤細(xì)胞緊密排列呈實(shí)體巢狀,細(xì)胞大,胞漿豐富,瘤體內(nèi)微血管完整;HIFU+V-LCTL組細(xì)胞明顯固縮變小,細(xì)胞核出現(xiàn)固縮、碎裂和溶解。毛細(xì)血管壁結(jié)構(gòu)模糊,嗜伊紅染色增加,血管腔內(nèi)有大量紅細(xì)胞集聚。結(jié)論: HIFU技術(shù)和攜載化療藥物的