貫葉金絲桃素衍生物的制備及其抗腫瘤活性研究.pdf

1、貫葉金絲桃素(hyperforin,HF)是貫葉連翹(Hypericum perforatum L.)提取物中抗抑郁作用的主要活性成分之一,具有抗抑郁、抗菌、抗炎、抗腫瘤、抗老年癡呆和促進(jìn)學(xué)習(xí)記憶等多方面的藥理活性。HF遇光、氧、熱極易發(fā)生化學(xué)氧化降解。已有研究表明,HF乙酸酯等衍生物化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定并保留HF原有的藥理活性。為促進(jìn)我國貫葉連翹資源的深入開發(fā)與新藥研制,本論文圍繞著HF乙酸酯(Ac-HF)、HF八氫還原乙酸酯(8H-Ac—H

2、F)及HF—N,N二環(huán)己胺鹽(DCHA-HF)的制備及其抗腫瘤活性、作用機(jī)理進(jìn)行了研究。
　　 本文主要研究內(nèi)容與成果總結(jié)如下:
　　 1.以富含HF的提取物為原料,通過乙?；磻?yīng)、氫化還原反應(yīng)及成鹽反應(yīng)得到HF乙酸酯、HF八氫還原乙酸酯及HF-N,N二環(huán)己胺鹽的穩(wěn)定衍生物。
　　 2.采用制備高效液相色譜法分離制備了Ac-HF,其純度>99％。
　　 3.采用高速逆流色譜法分離制備Ac-HF和加貫葉金絲

3、桃素乙酯(Ac-AHF)。研究比較了多種不同溶劑系統(tǒng),考察了HSCCC的流速、轉(zhuǎn)速和進(jìn)樣量對分離效果的影響。采用優(yōu)化所得HSCCC工藝條件進(jìn)行Ac-HF和Ac-AHF制備分離,結(jié)果顯示,經(jīng)1次HSCCC分離,在6.5 h內(nèi)可同時(shí)分離純化得到132.5 mg Ac-HF(純度>98％)和7.4 mg Ac-AHF(純度>95％)。該方法操作簡捷,快速高效,費(fèi)用低廉,重現(xiàn)性好,是分離制備高純度Ac-HF和Ac-AHF的有效方法。本研究可為大

4、量制備這兩個化合物并進(jìn)行進(jìn)一步的藥理活性及其作用機(jī)制研究提供重要的物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　 4.對Ac-HF、8H—Ac-HF及DCHA-HF進(jìn)行了抗腫瘤活性篩選。采用MTT法、以阿霉素為陽性對照,考察了這3種衍生物對人宮頸癌細(xì)胞株Hela、人惡性黑色素瘤細(xì)胞株A375、人肝癌細(xì)胞株HepG2、乳腺癌細(xì)胞株MCF7、肺腺癌細(xì)胞株A549、人慢性髓性白血病細(xì)胞株K562及人白血病阿霉素耐藥細(xì)胞株K562/ADR的體外增殖抑制作用。結(jié)果表明

5、,Ac-HF、DCHA-HF對這7種腫瘤細(xì)胞株均有抑制作用,IC50值為3.24～64.14μM,而8H-Ac-HF的IC50值>100μM,不顯示抗腫瘤活性。Ac—HF、DCHA-HF對Hela、A375、A549、K562及K562/ADR細(xì)胞株表現(xiàn)出呈劑量依賴性的增殖抑制作用；而Ac-HF對于HepG2、DCHA-HF對于HepG2和MCF7表現(xiàn)出先上升后下降再上升的增殖抑制作用。
　　 5.用DAPI/TUNEL法和流式

6、細(xì)胞術(shù)考察了DCHA-HF對K562和HepG2細(xì)胞株的凋亡作用。DAPI/TUNEL法檢測結(jié)果表明:經(jīng)10μM的DCHA-HF孵育48 h后,K562和HepG2細(xì)胞出現(xiàn)明顯的凋亡現(xiàn)象,在激光掃描共聚焦顯微鏡下可看到許多散在分布的凋亡細(xì)胞,發(fā)出強(qiáng)烈的綠色或黃色熒光。
　　 流式細(xì)胞術(shù)分析顯示,經(jīng)DCHA—HF作用48 h后,K562、HepG2腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)晚期凋亡或者死亡現(xiàn)象；并且這種凋亡或死亡現(xiàn)象表現(xiàn)出明顯的劑量依賴關(guān)系。D